一更默契了、重要的洗滌
不充分的洗滌會(huì)導(dǎo)致差異和高背景,從而帶來(lái)不理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果共同學習。如果未結(jié)合的材料殘留在微孔板中順滑地配合,那么它會(huì)增加背景噪音。有必要的話效高,可增加洗滌液中的鹽濃度,這會(huì)阻止非特異結(jié)合反應(yīng)基礎。如果背景過(guò)高性能,懷疑洗滌不夠時(shí)多種方式,可以嘗試增加洗滌次數(shù)。
二技術創新、QIAGEN試劑盒檢測(cè)試劑要適量
切勿使用過(guò)多的QIAGEN試劑盒深入交流研討。如果濃度過(guò)高,或者未正確稀釋廣泛應用,則會(huì)導(dǎo)致高背景關註度。也不要顯色過(guò)度,如有必要哪些領域,優(yōu)化一下何時(shí)應(yīng)加入終止液敢於挑戰。
三、抗體濃度須優(yōu)化
如果試劑稍有不同建立和完善,則可能需要優(yōu)化抗體的量讓人糾結。非特異的抗體結(jié)合會(huì)增加背景。為了防止這一點(diǎn)穩定發展,切勿使用過(guò)多的一抗或二抗基石之一。
四、關(guān)鍵的封閉
封閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結(jié)合位點(diǎn)增持能力。這就降低了可產(chǎn)生信號(hào)的抗體非特異結(jié)合的機(jī)會(huì)共同努力。如果背景過(guò)高,懷疑封閉不充分追求卓越,那么可以嘗試使用更高濃度的封閉液很重要,或適當(dāng)延長(zhǎng)封閉時(shí)間。
目前主要有兩種類型的封閉液:蛋白和非離子型去污劑覆蓋。使用的類型須取決于多個(gè)因素異常狀況,包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原高效、抗體和檢測(cè)試劑應用創新。好的封閉液應(yīng)降低非特異性結(jié)合,但它不應(yīng)當(dāng)與抗原機構、抗體或檢測(cè)試劑發(fā)生相互作用的特性。
保證以上四個(gè)步驟不出錯(cuò),可以讓QIAGEN試劑盒發(fā)揮的作用基礎。