SYBR Green I是高靈敏的DNA熒光染料創新內容,適用于各種電泳分析特性,操作簡單:無須脫色或沖洗帶來全新智能。SYBR Green I 與dsDNA結(jié)合熒光信號會增強(qiáng)800-1000倍不折不扣,用SYBR Green I染色的凝膠樣品熒光信號強(qiáng)高質量,背景信號低充分發揮。可適用于多種電泳分析管理。(SYBR GreenⅠ的zui低檢出限:20pg DNA(254nm);60pg DNA(300nm 紫外透射)設計;此外,SYBR®GreenⅠ還可以用于檢測寡核苷酸(1-2ng,300nm 紫外透射)改進措施,比EB靈敏20至100倍優化程度。)SYBR Green I適合于多種凝膠電泳方法:瓊脂糖凝膠,聚丙烯酰胺凝膠電泳奮勇向前,脈沖電場凝膠電泳不斷豐富,和毛細(xì)管電泳等。SYBR Green I與雙鏈DNA的親和力非常高組建,因此可以用做電泳前染色各有優勢,對分子生物學(xué)中常用的酶(如:Taq酶、逆轉(zhuǎn)錄酶重要的意義、內(nèi)切酶持續、T4連接酶等)沒有抑制作用。另外占,SYBR Green I與EB相比高質量,誘變能力大大降低。
SYBR Green I核酸染料特點
高靈敏:至少可檢出20pg DNA,高于EB染色法25-100倍前景。
信噪比高:樣品熒光信號強(qiáng)進一步意見,背景信號低。
操作簡單:無須脫色或沖洗共享應用。
適用范圍廣:可適用于多種電泳分析生產能力。
使用方便:不影響其它修飾酶作用。
安全性高:分子克隆上明確誘變能力很低
使用方法
SYBR Green I預(yù)染方法
1. 該方法適于瓊脂糖凝膠電泳和PAGE凝膠電泳
2. 工作液的配制:用電泳緩沖液將10000×的SYBR GreenⅠ稀釋100倍示範推廣,即為SYBR GreenⅠ工作液堅持好。SYBR GreenⅠ工作液可以置2-8℃冷藏一個月以上。
3. 制膠:按常規(guī)方法制膠大幅增加,不含任何染料特性。
4. 樣品染色:向分析樣品中加入SYBR GreenⅠ工作液和載樣緩沖液,室溫放置10分鐘等特點,使SYBR GreenⅠ與樣品中DNA充分結(jié)合建言直達。SYBR GreenⅠ工作液加入量為總上樣量的1/10。
5. DNA Marker染色:將5μL DNA Marker和1μLSYBR GreenⅠ工作液混勻將進一步,室溫放置5分鐘充分發揮,使SYBR GreenⅠ與DNA充分結(jié)合。(商品Marker稀釋2-5倍后再電泳成就,否則電泳條帶會變形重要方式,特別是大片段。)
6. 上樣研究進展、電泳:按常規(guī)操作無障礙。
SYBR Green I后染方法
1. 按照常規(guī)方法進(jìn)行電泳。
2. 用PH=7.0-8.5的緩沖液(如:TAE互動互補,TBE或TE)發揮重要帶動作用,按照10000:1的比例稀釋SYBR GreenⅠ濃縮液,混勻意料之外,制成染色溶液文化價值。
3. 將染色溶液倒入合適的聚丙烯容器中,放入凝膠置之不顧,用鋁箔等蓋住容器使染料避光不斷完善。室溫振蕩染色10-30分鐘,染色時間因凝膠濃度和厚度而定方便。聚丙烯酰胺凝膠直接在玻璃平皿上染色基礎上,將配好的工作溶液輕輕地倒在膠板上,讓工作液均勻地覆蓋整個膠板應用領域,并染色30分鐘保持競爭優勢。玻璃平皿必須預(yù)先經(jīng)過硅烷化溶液處理(避免染料吸附在玻璃表面上)進行培訓。
4. 用紫外儀觀測。
SYBR Green I使用注意事項
1. 在"SYBR GreenⅠ預(yù)染色方法"中長效機製,電泳時間不要超過2小時法治力量,否則SYBR GreenⅠ會從DNA上分離出來,會產(chǎn)生彌散狀條帶分享。
2. 在常規(guī)用酒精沉淀核酸的過程中共享,SYBR Green I可以全部從雙鏈核酸上去掉。
3. 如果想對用 SYBR Green I 染過的膠進(jìn)行Southern blots方式之一,建議在預(yù)雜化和雜化溶液中加入0.1%- 0.3%的SDS生動。
4. 在紫外照射透視下,與雙鏈DNA接合的SYBR Green I呈現(xiàn)綠色熒光創新能力。如果膠中含有單鏈DNA則顏色為橘黃而不是綠色新品技。
5. SYBR Green對玻璃和非聚丙烯材料具有一定親合力。建議在稀釋溝通機製、貯存好宣講、染色等使用過程中用聚丙烯類容器。