免疫血清的制備是一項常用的免疫學(xué)實驗技術(shù)
更新時間:2020-07-07 點擊次數(shù):1847次
免疫血清的制備是一項常用的免疫學(xué)實驗技術(shù)重要的作用。價貢獻、高特異性的免疫血清可作為免疫學(xué)診斷的試劑(如用于制備免疫標(biāo)記抗體等),也可供特異性免疫治療用穩中求進。
免疫血清的效價高低取決于實驗動物的免疫反應(yīng)性及抗原的免疫原性統籌。如以免疫原性強(qiáng)的抗原刺激高應(yīng)答性的機(jī)體,硡f同控製?色@得價的免疫血清堅實基礎。
一、免疫方法
根據(jù)抗原的性質(zhì)不同而異重要作用。下面以制備家兔抗人IgG免疫血清為例作具體說明。
1.用剪刀剪去家兔兩后腳掌的部分兔毛最為顯著,以酒精及碘酒消毒皮膚;
2.次免疫:用2ml注射器吸取弗氏*佐劑(FCA)乳化的抗原(人IgG)下稱FCA-IgG)液1ml尤為突出,每側(cè)腳掌皮下各注入0.5ml。
3.第二次免疫:間隔10-14天后環境,于兩側(cè)窩及鼠蹊部腫大的淋巴結(jié)內(nèi)注入FCA-IgG空間載體,每個淋巴結(jié)注0.1ml,其余注入淋巴結(jié)附近皮下共1ml相對簡便。如淋巴結(jié)未腫大或腫大不明顯時重要組成部分,直接注入兩側(cè)窩及鼠蹊部皮下。
4.間隔7-10天后合作,從耳靜脈采血0.5~1.0ml勃勃生機,分離血清,以雙相瓊脂擴(kuò)散試驗測定免疫血清的抗體效價(即試血)極致用戶體驗。效價至少應(yīng)達(dá)到1∶16以上時才能放血提供有力支撐。
5.若效價未達(dá)到要求,可用不加佐劑的抗原液(人IgG)耳靜脈內(nèi)注射免疫建議。即于1周內(nèi)注射3次品率,分別為0.1、0.3不斷發展、0.5ml積極影響。間隔1周再試血。如效價達(dá)到要求應(yīng)立即放血緊密協作。另外越來越重要,也可在第2次免疫后,以弗氏不*佐劑(FIA)乳化的抗原(人IgG)(簡稱FIA-IgG)再免疫1-2次更加廣闊。注射部位損耗、劑量和間隔均同第2次,再試血測抗體效價非常完善,如效價達(dá)到要求立即放血性能穩定。
二全面革新、放血
(一) 心臟采用血法
1.家兔仰面,四肢縛于動物固定架上(或由助手抓住四肢固定);
2.剪去左胸部兔毛情況正常,消毒皮膚;
3.用左姆指摸到胸骨劍突處行業分類,食指及中指放在右胸處輕輕向左推心臟,并使心臟固定于左胸側(cè)位置提高鍛煉。然后發展邏輯,以左拇指觸摸心臟搏動*的部位;
4.用50ml注射器(連接16號針頭),傾針45°角度有所提升,對準(zhǔn)心搏*處刺入心臟抽血致死;
5.將抽取的血液立即注入無菌三角燒瓶中聽得進,待凝固后分離血清。
(二) 頸動脈放血法
1.家兔仰臥同上固定先進水平。頭部略放低以暴露頸部便利性。剃毛及消毒皮膚;
沿頸部中線切開皮膚約10cm,分離皮下組織重要平臺,直至暴露出氣管兩側(cè)的胸鎖乳突肌;
3.分離胸鎖乳突肌與氣管間的頸三角區(qū)疏松組織深刻認識,暴露出頸總動脈后使之游離;
4.于動脈下套入兩根黑絲線,分別置于遠(yuǎn)心及近心端應用提升。結(jié)扎遠(yuǎn)心端的絲線主動性。近心端的動脈用血管夾夾住;
5.用尖頭小剪刀在兩根絲線間的動脈璧上剪一小口,插入塑料放血管發展的關鍵。再將近心端的絲線結(jié)扎固定于放血管上道路,以防放血管滑脫;
6.松開血管夾,使血液流入滅菌三角燒瓶中帶動產業發展。一般一只家兔可放血80~100ml責任製。
三、分離血清
將三角燒瓶的血置37℃溫箱1小時倍增效應,再置4℃冰箱內(nèi)3~4小時規則製定。待血液凝固血*收縮后,用毛細(xì)滴管吸取血清優化服務策略。于3000rpm離心15分鐘關規定,取上清加入防腐劑(0.01%硫柳汞或0.02%疊氮鈉,終濃度)更讓我明白了,分裝后置4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/div>