細(xì)胞轉(zhuǎn)入細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基養(yǎng)要有一個(gè)適應(yīng)過(guò)程
更新時(shí)間:2022-12-14 點(diǎn)擊次數(shù):1170次
血清仍是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中最基本的的添加物不斷豐富,尤其是在原代培養(yǎng)或者細(xì)胞生長(zhǎng)狀況不良時(shí)連日來,常常會(huì)先使用有血清的培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)服務水平,待細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛以后攻堅克難,再換成無(wú)血清培養(yǎng)液管理。
細(xì)胞轉(zhuǎn)入細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基養(yǎng)要有一個(gè)適應(yīng)過(guò)程,一般要逐步降低血清濃度生動,從10%減少到5%新型儲能,3%,1%新品技,直至無(wú)血清培養(yǎng)範圍。
在降低過(guò)程中要注意觀察細(xì)胞形態(tài)是否發(fā)生變化,是否有部分細(xì)胞死亡紮實做,存活細(xì)胞是否還保持原有的功能和生物學(xué)特性等空間廣闊。
在實(shí)驗(yàn)后這些細(xì)胞一般不再繼續(xù)保留,很少有細(xì)胞能夠長(zhǎng)期培養(yǎng)于無(wú)血清培養(yǎng)基而不發(fā)生改變的提供深度撮合服務。細(xì)胞轉(zhuǎn)入無(wú)血清培養(yǎng)之前服務品質,要留有種子細(xì)胞,種子細(xì)胞按常規(guī)培養(yǎng)于含血清的培養(yǎng)基中組成部分,以保證細(xì)胞的特性不發(fā)生變化集成。
為了使細(xì)胞適應(yīng)無(wú)血清培養(yǎng),關(guān)鍵的是使所培養(yǎng)細(xì)胞:
1.處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)中期
2.>90% 活細(xì)胞率
3.適應(yīng)時(shí)以較高的起始細(xì)胞接種
細(xì)胞適應(yīng)無(wú)血清培養(yǎng)基的方法
1.直接適應(yīng)——細(xì)胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無(wú)血清培養(yǎng)基(SFM)中互動講。
一些類型細(xì)胞可直接從包含血清的培養(yǎng)基適應(yīng)無(wú)血清培養(yǎng)基穩定性。對(duì)于直接適應(yīng),接種細(xì)胞密度應(yīng)該:2.5×10~3.5×10細(xì)胞/ml過程中。當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×10~3×10細(xì)胞/ml時(shí)去突破,傳代培養(yǎng)細(xì)胞。當(dāng)細(xì)胞密度在培養(yǎng)4到7天后達(dá)到2×10~4×10細(xì)胞/ml時(shí)達到,細(xì)胞適應(yīng)了無(wú)血清培養(yǎng)基智能設備。每隔3~5天,當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×10~3×10細(xì)胞/ml,細(xì)胞活率在90%時(shí)特點,貯備的適應(yīng)了無(wú)血清培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)物應(yīng)該再次傳代培養(yǎng)積極回應。
2.連續(xù)適應(yīng)——分好幾步把細(xì)胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無(wú)血清培養(yǎng)基(SFM)中,與直接適應(yīng)相比較向好態勢,連續(xù)適應(yīng)趨向?qū)τ诩?xì)胞更加溫和一些平臺建設。
(1)以2倍正常接種密度接種生長(zhǎng)活躍的細(xì)胞培養(yǎng)物到75%有血清培養(yǎng)基:25%SFM 混合培養(yǎng)基中服務機製,傳代培養(yǎng)貢獻力量。
(2)當(dāng)細(xì)胞密度>5×10細(xì)胞/ml時(shí),以2×10到3×10細(xì)胞/ml細(xì)胞密度大幅拓展,在有血清培養(yǎng)基:SFM為50∶50的混合培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)發行速度。
(3)以2×10到3×10細(xì)胞/ml細(xì)胞密度,25%有血清培養(yǎng)基和75% SFM中傳代培養(yǎng)與時俱進。
(4)當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×10到3×10細(xì)胞/ml(接種后4到6天)性能,在99.99%SFM培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。
(5)每隔3到5天綜合運用,當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×10到3×10細(xì)胞/ml供給,細(xì)胞活率在90%時(shí),貯備的適應(yīng)了無(wú)血清培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)物應(yīng)該再次傳代培養(yǎng)實事求是。