淺析生化試劑應(yīng)用常見(jiàn)問(wèn)題
更新時(shí)間：2014-04-28 點(diǎn)擊次數(shù)：3115次
生化試劑應(yīng)用常見(jiàn)問(wèn)題的探討
試劑空白吸光度是反映試劑質(zhì)量的指標(biāo)之一，但不能反映試劑質(zhì)量的全部。試劑成份、純度長遠所需、用量及穩(wěn)定性，才是保證試劑質(zhì)量的關(guān)鍵所在讓人糾結。目前市售的一些試劑具有抗干擾作用規模，主要是通過(guò)加入抗干擾物質(zhì)或使用新的色素原以避免內(nèi)源性物質(zhì)的干擾。但值得注意的是：一些試驗(yàn)項(xiàng)目在消除內(nèi)源性物質(zhì)干擾的同時(shí)基石之一，會(huì)帶來(lái)樣品含量真實(shí)性的變化聯動。
1 試劑空白
試劑空白吸光度是反映試劑質(zhì)量的指標(biāo)之一。每種試劑都有一定的空白吸光度范圍共同努力，試劑空白吸光度的改變往往提示該試劑的變質(zhì);如利用Trinder反應(yīng)為原理的檢測(cè)試劑會(huì)因含酚類物質(zhì)被氧化為醌而變?yōu)榧t色行業內卷。堿性磷酸酶、r一谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶逐漸完善、淀粉酶等檢測(cè)試劑會(huì)因基質(zhì)分解出硝基酚或酚基苯胺而變黃參與能力。有些試劑久置后變渾濁。這些情況均可使空白吸光度升高是目前主流。丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶充分發揮、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶等負(fù)反應(yīng)，在放置過(guò)程中其試劑空白吸光度會(huì)因NADH自行氧化為NAD+而下降充分發揮。原則上選擇適用，吸光度上升的反應(yīng)，其試劑空白吸光度越低越好設計，不能超過(guò)一個(gè)高限;相反業務指導，吸光度下降的反應(yīng)，其試劑空白吸光度不能低于一個(gè)低限就此掀開。因此形勢，試劑空白吸光度限值，常作為程序參數(shù)輸入儀器取得明顯成效，如經(jīng)核查超限，儀器會(huì)自動(dòng)報(bào)警數據，提示更換試劑創新的技術。需要指出的是，還原型輔酶I(或II)等投料量不足或劣質(zhì)的原料顯著，往往需要加大用量快速增長，才使“表觀”吸光度上升開放以來，湊合過(guò)試劑空白核對(duì)的“關(guān)”，其后果為如下情況：
1.1 線性范圍變窄 現(xiàn)象：高值測(cè)不高高質量。原因：生產(chǎn)試劑時(shí)有效成分投料量不足;試劑成份穩(wěn)定性較差提供了有力支撐。
1.2 靈敏度變低現(xiàn)象：酶促反應(yīng)速度曲線斜率下降，測(cè)定結(jié)果有嚴(yán)重系統(tǒng)誤差前景。原因：試劑底物濃度不足進一步意見。
1.3 低值偏高 現(xiàn)象：試劑空白的變化曲線(吸光度VS時(shí)間)明顯波動(dòng)。原因：試劑自身不穩(wěn)定共享應用，自行分解;工具酶純度不夠生產能力，雜酶含量超限，導(dǎo)致干擾作用示範推廣。
2 樣品信息
樣品的溶血堅持好、脂血、黃疸等會(huì)對(duì)測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生非化學(xué)反應(yīng)的干擾大幅增加。因此特性，應(yīng)根據(jù)溶血、脂濁等特點、黃疸的光譜吸收特性建言直達，采用雙波長(zhǎng)或多波長(zhǎng)的檢測(cè)模式，并在結(jié)果計(jì)算中扣除因溶血建設應用、脂血支撐作用、黃疸引起的影響，減少干擾程度動力。
3 測(cè)定范圍
每種待測(cè)物都有一個(gè)可測(cè)定的濃度或活性范圍同時，樣品結(jié)果若超過(guò)此范圍，分析儀將顯示結(jié)果超過(guò)范圍的提示效高性。表示試劑已經(jīng)變質(zhì)設計標準，應(yīng)更換合格試劑。
4 底物耗盡
使用連續(xù)監(jiān)測(cè)法互動互補、兩點(diǎn)法測(cè)定酶活性時(shí)發揮重要帶動作用，若酶活性非常高，底物接近被耗盡意料之外，吸光度上升或下降會(huì)超過(guò)某一吸光度變化范圍文化價值，監(jiān)測(cè)期的吸光度將偏離線性，使測(cè)定結(jié)果不可靠置之不顧。
5 酶的預(yù)活化
測(cè)定血清中的某些酶不斷完善，如CK，離體(采血)后很容易失活。失活的原因是酶活性中心的活性基因巰基(一SH)被氧化造成的基礎上。只有通過(guò)適當(dāng)?shù)倪€原作用才能重新激活各領域。如CK—NAC試劑盒即含有CK活化劑，名為N一乙酰半胱氨酸保持競爭優勢。實(shí)驗(yàn)研究證明進行培訓，NAC對(duì)血清中已失活的CK活化過(guò)程約需180 S。這就是CK測(cè)定為什么要延遲時(shí)間較長(zhǎng)的理論依據(jù)長效機製。在AST法治力量，ALT采用IFCC推薦方法測(cè)定時(shí)需要磷酸吡哆醛預(yù)活化。需要強(qiáng)調(diào)：含有活化劑的生化試劑說服力，其測(cè)定酶活性的結(jié)果要高些搶抓機遇。
6 校準(zhǔn)與結(jié)果溯源性
酶的校正：要滿足在同一方法學(xué)、同一測(cè)定條件表示、與理論計(jì)算的FACTOR值差異不大全面闡釋，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)有明顯影響因素，方可 進(jìn)行校正競爭力所在。
檢驗(yàn)結(jié)果溯源性引人註目，得建立一個(gè)可靠的參考系統(tǒng)作為準(zhǔn)確性基礎(chǔ)，然后將準(zhǔn)確性轉(zhuǎn)移到常規(guī)方法測(cè)定中去溝通機製，使常規(guī)方法測(cè)定結(jié)果可溯源到參考系統(tǒng)所提供的準(zhǔn)確性基礎(chǔ)上來(lái)好宣講。在實(shí)現(xiàn)溯源性目標(biāo)過(guò)程中，永遠(yuǎn)以患者新鮮標(biāo)本為實(shí)驗(yàn)對(duì)象領先水平，以方法學(xué)對(duì)比試驗(yàn)方法為驗(yàn)證手段。方法學(xué)對(duì)比試驗(yàn)常采用回歸方程進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，假如斜率接近1設計能力，截距較小品牌，這意味著實(shí)驗(yàn)室常規(guī)方法對(duì)標(biāo)本測(cè)定結(jié)果和溯源目標(biāo)參考系統(tǒng)對(duì)標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果非常接近。
臨床化學(xué)中參考標(biāo)準(zhǔn)(二級(jí)標(biāo)準(zhǔn))要有通用性更為一致，但生產(chǎn)廠家提供的校準(zhǔn)液并非通用的等形式，只適用于某一特定的分析系統(tǒng)。
校準(zhǔn)液標(biāo)示值往往是按其基質(zhì)偏差修正的研究與應用，所以標(biāo)示值并非實(shí)際值飛躍。校準(zhǔn)液、質(zhì)控血清通常是經(jīng)過(guò)處理的混合人或動(dòng)物血清全面協議，這種制備物在特定分析系統(tǒng)中往往與人新鮮血清反應(yīng)性不同而產(chǎn)生基質(zhì)偏差重要部署。如總膽固醇測(cè)定基質(zhì)效應(yīng)研究指出：校準(zhǔn)液酶法測(cè)定回收結(jié)果偏低可達(dá)5%~7%。
7 試劑抗干擾作用的合理性有些液體雙試劑工具，其實(shí)質(zhì)并不真正具備抗干擾的能力而只是解決了試劑的液體化和穩(wěn)定性問(wèn)題的過程中。如發展契機，ALT試劑盒中，NADH在pH7.5~7.8水溶液中極不穩(wěn)定促進進步，在pH>8.7時(shí)才能穩(wěn)定保存。因此優勢領先，為了保證試劑穩(wěn)定性迎來新的篇章，液體雙試劑的R1需要維持pH>8.7，但此時(shí)LDH活性大大下降推動並實現，就失去消除內(nèi)源性丙酮酸的功能薄弱點，只有加入試劑R2后，反應(yīng)混合液的pH下降至LDHzui適pH優化程度，在經(jīng)過(guò)延遲時(shí)間60 S后積極性，才能消除內(nèi)源性丙酮酸的干擾。再如不斷豐富，Tfinder反應(yīng)中抗Vc干擾問(wèn)題：由于維生素c易氧化實施體系，樣品中Vc會(huì)競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)生成的過(guò)氧化氫，而產(chǎn)生負(fù)干擾各有優勢。因此效果較好，在試劑R1中加入抗壞血酸氧化酶，這種方法是有效的持續，但不一定有很大的意義等多個領域。因?yàn)閂c干擾必須同時(shí)具備二個(gè)條件：a)Vc攝入量較多;b)采血后立即測(cè)定。實(shí)驗(yàn)表明離體血清中Vc在90 min后會(huì)全部被氧化必然趨勢。又如促進善治，使用胺類新色原。a)分子共軛結(jié)構(gòu)特性使得靈敏度提高多樣性，相應(yīng)可以減少樣本用量發揮效力，zui終能有效地降低干擾物的量.b)使生成胺類色素原zui大吸收峰由500~520 nm移至550 nm以上，以避開(kāi)黃疸落到實處、溶血干擾服務水平。如：亞鐵氰化鉀一H 0 ，能有效避免黃疸干擾的理論依據(jù)是亞鐵氰化鉀與H技術創新。0處理方法。親和力遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于膽紅素。
甘油三酯測(cè)定持續向好，有人主張選用雙試劑方法消除內(nèi)源性甘油習慣，這個(gè)方法是可行的，但忽視了一個(gè)化學(xué)平衡理論進展情況。因?yàn)樗械孽ピ谒芤褐卸疾皇呛?jiǎn)單地以酯的形式存在的積極性，而是以水解與酯化相平衡的形式存在綠色化發展。在一個(gè)平衡體系中，如果去除游離甘油不久前，這個(gè)平衡就向生成甘油方向移動(dòng)用上了，甘油三酯就會(huì)重新水解，生成新的甘油能力建設，達(dá)到新的平衡關註，因此樣品與R1試劑孵育時(shí)間越長(zhǎng)，測(cè)得甘油三酯值就越低無障礙。甘油三酯測(cè)定連日來，不僅要去除游離甘油，而且還要克服樣本含量真實(shí)性發(fā)生的變化認為，試劑中必須加入甘油激酶系統，并且延遲時(shí)間要標(biāo)準(zhǔn)化。所以重要意義，一些試驗(yàn)項(xiàng)目在消除內(nèi)源性物質(zhì)干擾的同時(shí)交流等，會(huì)帶來(lái)樣品含量真實(shí)性的變化。
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