NobleRyder NP-40裂解液
NobleRyder NP-40裂解液NobleRyder NP-40裂解液 即用型液體試劑 P4810-100ml
NobleRyder NP-40裂解液
產(chǎn)品簡介：
多種成分均可以從細(xì)胞中提取總蛋白，如 Triton市場開拓、SDS措施、NP-40 等。NP-40 裂解液(NP-40 Lysis Buffer)是采用一種溫和的裂解方法獲得總蛋白的裂解液要落實好。所獲得的蛋白質(zhì)可以用于 PAGE 電泳緊密相關、 Western、免疫沉淀(Immunol Precipitation 先進技術， IP)和免疫共沉淀(co-IP)等培訓，并含有多種蛋白酶抑制劑成分，可有效抑制蛋白的降解宣講手段，并維持原有的蛋白間相互作用重要工具。
NobleRyder NP-40 Lysis Buffer 主要由 Tris-HCl、NaCl配套設備、NP-40 以及 sodium pyropho-sphate更優質，β-glycerophosphate，sodium fluoride, EDTA 等多種蛋白酶抑制劑組成推進高水平。用NP-40 Lysis Buffer 得到的蛋白脫穎而出，可以用 BCA 蛋白定量試劑盒和 Bradford 蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度。
產(chǎn)品組成：
編號 名稱 | P4810 | Storage |
NP-40 Lysis Buffer | 100ml | -20℃ |
PMSF(100mM) | 1.5ml | -20℃ |
使用說明書 | 1份 | |
操作步驟(僅供參考)：
(一)貼壁培養(yǎng)細(xì)胞
1生產創效、取 NP-40 Lysis Buffer 置于室溫溶解混勻廣泛應用，加入 PMSF，使 PMSF 終濃度為 1mM橫向協同。
2哪些領域、去除貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液橋梁作用，用 PBS、NS 或無血清培養(yǎng)液清洗 1 次求索，低速離心讓人糾結，棄上清，留取沉淀穩定發展。
3基石之一、按照 6 孔板每孔加入 150～250μl 含有 PMSF 的裂解液的比例，加入 NP-40 Lysis Buffer增持能力。移液器輕輕吹打共同努力，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。置于冰上或 4℃裂解 15～30min追求卓越，通常裂解液作用于細(xì)胞 1～3s內(nèi)逐漸完善，細(xì)胞就會被裂解。
4合理需求、10000～12000g是目前主流，4℃離心 5～10min(如無低溫離心機(jī)，室溫下離心亦可)高質量，取上清充分發揮。
5、進(jìn)行后續(xù)的 SDS-PAGE管理、Western設計、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(二)懸浮培養(yǎng)細(xì)胞
1改進措施、取 NP-40 Lysis Buffer 置于室溫溶解混勻提供堅實支撐，加入 PMSF，使 PMSF 終濃度為 1mM高產。低速離心懸浮細(xì)胞，棄上清發揮作用，收集沉淀良好。
2、用手指輕彈細(xì)胞銘記囑托，使其松散引領。按照 6 孔板每孔細(xì)胞加入 150～200μl 含有 PMSF 的裂解液的比例，加入 NP-40 Lysis Buffer 示範。通常 6 孔板每孔細(xì)胞加入 150μl 裂解液已經(jīng)足夠應用前景，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到 200～250μl。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞提供了有力支撐，充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀激發創作。
3前景、10000～12000g，4℃離心 5～10min(如無低溫離心機(jī)增幅最大，室溫下離心亦可)共享應用，取上清。
4標準、進(jìn)行后續(xù)的 SDS-PAGE示範推廣、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作即將展開。
(三)組織樣本
1大幅增加、取 NP-40 Lysis Buffer 置于室溫溶解混勻，加入 PMSF傳承，使 PMSF 終濃度為 1mm等特點。把組織jian切成細(xì)小的碎片，越小越好形式。
2建設應用、取在液氮或超低溫冰箱中冷凍 30min 以上的組織，迅速用液氮研磨日漸深入，研磨過程盡量控
制在 1～2min 之內(nèi)動力，以減少蛋白的降解。
3互動式宣講、按照每 20mg 組織加入 150～250μl 裂解液的比例加入含有 PMSF 的裂解液效高性。冰上或 4℃裂解 30～60min。
4自動化、 步驟 3提升、4 亦可以采用如下過程：按照每 20mg 組織加入 150～250μl 裂解液的比例，加入含有 PMSF 的 NP-40 Lysis Buffer不折不扣。用玻璃勻漿器或組織研磨器勻漿支撐能力，直至充分裂解，該過程盡量控制在 1～2min 之內(nèi)高效利用，以減少蛋白的降解特征更加明顯。
5、10000～12000g數字化，4℃離心 5～15min(如無低溫離心機(jī)方便，室溫下離心亦可)，取上清各領域。
6應用領域、進(jìn)行后續(xù)的 PAGE、Western進行培訓、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作發展機遇。
注意事項：
1長效機製、在貼壁培養(yǎng)細(xì)胞的操作步驟中，去除貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液后服務體系，如果血清中的蛋白沒有干擾說服力，可以不用清洗。
2分析、如果裂解不充分可以適當(dāng)增加裂解液的用量表示，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量非常激烈。
3競爭力所在、在培養(yǎng)細(xì)胞的裂解中，如果細(xì)胞量較多領域，必需分裝成 50～100 萬細(xì)胞/離心管溝通機製，然后再裂解。大團(tuán)的細(xì)胞較難裂解充分註入新的動力，而少量的細(xì)胞由于裂解液容易和細(xì)胞充分接觸領先水平，相對比較容易裂解充分。
4雙重提升、 如果組織樣品本身非常細(xì)小戰略布局，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈 Vortex使樣品裂解充分表現明顯更佳。然后同樣離心取上清狀態，用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是比較方便指導，不必使用勻漿器廣泛認同，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
5流動性、溶解 NobleRyder NP-40 Lysis Buffer 時鍛造，應(yīng)盡量縮短溶解時間，避免裂解液中的有效成分失效具體而言。
6工具、細(xì)胞裂解的操作步驟，應(yīng)置于冰上或 4℃進(jìn)行發展契機。
7、為了您的安全和健康促進進步，請穿實驗服并戴一次性手套操作發力。
有效期：12個月有效。
相關(guān)產(chǎn)品：
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C0930 | yi蛋白酶- EDTA 溶液(0.25%:0.02%) |
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