細(xì)胞凍存液
細(xì)胞凍存液 C0050 NobleRyder 100ml 360.00此主要是由血清和DMSO組成確定性,適合于大多數(shù)細(xì)胞的凍存,其凍存方法與常規(guī)方法相同重要性。
細(xì)胞的凍存和復(fù)蘇
一研究進展、細(xì)胞凍存液原理
在不加任何條件下直接凍存細(xì)胞時(shí)進行探討,細(xì)胞內(nèi)和外環(huán)境中的水都會(huì)形成冰晶,能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)發(fā)生機(jī)械損傷發展需要、電解質(zhì)升高攻堅克難、滲透壓改變、脫水顯示、PH改變生動、蛋白變性等,能引起細(xì)胞死亡創新能力。如向培養(yǎng)液加入保護(hù)劑,可使冰點(diǎn)降低範圍。在緩慢的凍結(jié)條件下求得平衡,能使細(xì)胞內(nèi)水份在凍結(jié)前透出細(xì)胞。貯存在-130℃以下的低溫中能減少冰晶的形成空間廣闊。
細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)速度要快至關重要,使之迅速通過細(xì)胞zui易受損的-5~0℃,細(xì)胞仍能生長服務品質,活力受損不大技術發展。
目前常用的保護(hù)劑為二甲亞砜(DMSO)和甘油,它們對(duì)細(xì)胞無毒性集成,分子量小重要手段,溶解度大,易穿透細(xì)胞穩定性。
二像一棵樹、細(xì)胞凍存液操作步驟
(一)凍存
1、消化細(xì)胞(同實(shí)驗(yàn)二)去突破,將細(xì)胞懸液收集至離心管中能運用。
2、1000rpm離心10分鐘智能設備,棄上清液不可缺少。
3、沉淀加特點,輕輕吹打均勻積極回應,計(jì)數(shù),調(diào)整至5×106/ml左右向好態勢。
4平臺建設、將懸液分至凍存管中,每管1 ml貢獻力量。
5使用、將凍存管口封嚴(yán)大幅拓展。如用安瓿瓶則火焰封口,封口一定要嚴(yán)更加堅強,否則復(fù)蘇時(shí)易出現(xiàn)爆裂與時俱進。
6、貼上標(biāo)簽初步建立,寫明細(xì)胞種類綜合運用,凍存日期。凍存管外拴一金屬重物和一細(xì)繩的方法。
7實事求是、按下列順序降溫:室溫→4℃(20分鐘〕→冰箱冷凍室(30分鐘)→低溫冰箱(-30℃ 1小時(shí))→氣態(tài)氮(30分鐘)→液氮。
注意:操作時(shí)應(yīng)小心落到實處,以免液氮凍傷服務水平。液氮定期檢查,隨時(shí)補(bǔ)充倍增效應,不能揮發(fā)干凈規則製定,一般30立升的液氮能用1~1.5月。
(二)復(fù)蘇
1優化服務策略、準(zhǔn)備一個(gè)茶缸或1000ml的燒壞關規定,內(nèi)裝2/3杯37℃的溫水。
2兩個角度入手、從液氮中取出凍存管建強保護、迅速置于溫水中并不斷攪動(dòng)。使凍存管中的凍存物在1分鐘之內(nèi)融化創新為先。
3真正做到、打開凍存管,將細(xì)胞懸液吸到離心管中創新延展。
4強化意識、1000rpm離心10分鐘,棄去上清液基本情況。
5現場、沉淀加10ml培養(yǎng)液,吹打均勻力量,再離心10分鐘我有所應,棄上清液。
6深入實施、加適當(dāng)培養(yǎng)基后將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中至關重要,37℃培養(yǎng),第二天觀察生長情況效果。
三有所應、試劑和器材
器材:液氮罐足了準備、凍存管(塑料螺口凍存管或安瓿瓶)、離心管著力提升、吸管深刻內涵、離心機(jī)等
試劑:0.25%胰酶、培養(yǎng)基融合、含保護(hù)劑的培養(yǎng)基(即凍存液)
C0050 NobleRyder 100ml 360.00
此主要是由血清和DMSO組成深入闡釋,適合于大多數(shù)細(xì)胞的凍存,其凍存方法與常規(guī)方法相同完成的事情。
C0170 | 10×PBS統籌,PH7.2-7.4,10倍濃縮液協同控製,液體 | NobleRyder | 500ml | 100.00 |
C0260 | 1M Hepes溶液(細(xì)胞培養(yǎng)) | NobleRyder | 125ml | 236.00 |
C0140 | D-Hanks(HBSS)不含鈣鎂堅實基礎,不含酚紅 | NobleRyder | 500ml | 100.00 |
C0130 | D-Hanks(HBSS)不含鈣鎂,含酚紅 | NobleRyder | 500ml | 100.00 |
C0100 | D-PBS(DPBS) | NobleRyder | 500ml | 80.00 |
C0120 | Hanks(HBSS)含鈣鎂重要作用,不含酚紅 | NobleRyder | 500ml | 100.00 |
C0110 | Hanks(HBSS)含鈣鎂可能性更大,含酚紅 | NobleRyder | 500ml | 100.00 |
C0190 | L-谷氨酰氨溶液(L-Glutamine顯示,Liquid)(200mM) | NobleRyder | 125ml | 80.00 |
C0160 | PBS緩沖液(液體)PH7.2-7.4 | NobleRyder | 500ml | 80.00 |
C0200 | 丙酮酸鈉溶液(Sodium Pyruvate)100mM | NobleRyder | 125ml | 100.00 |
C0250 | 非必需氨基酸溶液(100×) | NobleRyder | 125ml | 140.00 |
C0240 | 青鏈霉素混合液(100×) | NobleRyder | 125ml | 80.00 |
C0050 | NobleRyder | 100ml | 360.00 | |
C0210 | 胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%)不含酚紅 | NobleRyder | 125ml | 90.00 |
P0220 | 胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%)含酚紅 | NobleRyder | 125ml | 90.00 |
C0230 | 胰蛋白酶消化液(0.25%)不含酚紅 | NobleRyder | 125ml | 90.00 |
N0080 | 2×HEPES緩沖鹽溶液 | NobleRyder | 100ml | 100.00 |