線粒體提取試劑盒使用說明
一，試劑盒組份
組份 | P0940 （50T） | P0940 （100T） |
Lysis Buffer | 50 mL | 100 mL |
Mito-Wash Buffer | 25 mL | 50 mL |
Store Buffer | 5 mL | 10 mL |
二更高要求，說明
線粒體提取試劑盒用于從動物細胞或組織中分離出完整而純化的線粒體越來越重要的位置。適合于動物軟組織（肝或腦組織）和硬組織（肌肉）以及培養(yǎng)細胞的線粒體的制備。其制備物產量高共同學習，可以被用于細胞凋亡順滑地配合、信號傳遞、代謝和蛋白組學等的研究效高。
三前沿技術，操作步驟
1. 樣本處理
a. 組織勻漿：稱取100~200 mg新鮮組織如肝臟、腦性能、心肌等多種方式，PBS或生理鹽水沖洗，洗凈血水技術創新，濾紙吸干深入交流研討，用剪刀剪為碎塊放入小容量玻璃勻漿器內。加入1.0 mL冰預冷的Lysis Buffer廣泛應用，0℃冰浴上下研磨組織20次關註度；
b. 培養(yǎng)細胞勻漿：消化細胞，PBS洗滌去完善，800 × g 5~10 min離心收集細胞橋梁作用。計數推進高水平。每次提取需要5 × 107個細胞，加入1.0 mL冰預冷的Lysis Buffer重懸細胞拓展應用，將細胞懸液轉移到小容量玻璃勻漿器內生產創效，0℃冰浴研磨30~40次；
2. 將組織或細胞勻漿物轉移到離心管管理，4℃優化上下，1000× g 離心5 min；
3. 取上清模樣，加入一新的離心管中生產體系，4℃，1000× g 再次離心5 min很重要。
4．取上清能力和水平，加入一新的離心管中，4℃異常狀況， 12,000 × g 離心10 min研究。離心后的上清含胞漿成分，可從中提取胞漿蛋白應用創新。將上清轉移到新離心管提高，線粒體沉淀在管底；
5. 在線粒體沉淀中加入0.5 mL Wash Buffer重懸線粒體沉淀的特性，4℃交流，1000× g 離心5 min；
6．取上清提供堅實支撐，加入一新的離心管中還不大，4℃， 12,000 × g 離心10 min信息化技術。棄上清發揮作用，高純度的線粒體沉淀在管底；
6. 用50 -100μL Store Buffer 或合適的反應緩沖液重懸線粒體沉淀系統性，立即使用或-70℃保存勇探新路。
四注意事項：
1. 為保證獲得完整的線粒體單產提升，*是全程低溫操作就此掀開。第二是快速。第三今年，在不破壞亞細胞器的情況下破碎細胞是制備線粒體的zui關鍵環(huán)節(jié)穩步前行。與組織塊相比，培養(yǎng)細胞特別是貼壁培養(yǎng)細胞在用玻璃勻漿器勻漿時較難破壁動手能力，因而要選用小容量玻璃勻漿器逐步改善、間隙嚴密的研杵上下研磨培養(yǎng)細胞意見征詢。
2. 以離心力g計算正確的離心速度，不同的離心機可據此精確計算離心速度大大提高。
3. 進行Western Blot和2D-膠電泳，可直接加入上樣緩沖液裂解線粒體。
五儲存：四周內使用可4℃儲存不折不扣，長期置-20℃
轉速與離心力換算
G＝1.11×（10-5）×R×[rpm]２
G為離心力新產品，一般以ｇ（重力加速度）的倍數來表示；
[rpm]２即：轉速的平方積極參與； R為半徑問題分析，單位為厘米。
