NobleRyder Western及IP細(xì)胞裂解液
NobleRyder Western及IP細(xì)胞裂解液(無抑制劑) 即用型液體試劑 P4829-100ml
Western及IP細(xì)胞裂解液(無抑制劑)
產(chǎn)品簡介：
多種成分均可以從細(xì)胞中提取總蛋白擴大，如Triton、SDS可靠保障、NP-40等，Western及IP細(xì)胞裂解液是采用一種非變性裂解方法來裂解細(xì)胞，并獲得總蛋白的裂解液平臺建設。所獲得的蛋白質(zhì)可以用于PAGE電泳，Western，免疫沉淀(Immunol Precipitation,IP)和免疫共沉淀(co-IP)等使用，主要由Tris-HCl大幅拓展、NaCl、低濃度Triton X-100優化程度， 低濃度sodium pyrophosphate等組成積極性，不含蛋白酶、磷酸酶抑制劑不斷豐富，并維持原有的蛋白間相互作用實施體系。
用Western及IP細(xì)胞裂解液(無抑制劑)(Cell lysis buffer for Western and IP without inhibitors)得到的蛋白，可以用BCA蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度各有優勢。由于含有較高濃度的Triton X-100等干擾物質(zhì)效果較好，不宜用Bradford法測定由Western及IP細(xì)胞裂解液獲得樣本的蛋白濃度。
NobleRyder Western及IP細(xì)胞裂解液
產(chǎn)品組成：
編號 名稱 | P4829 | Storage |
Western及IP細(xì)胞裂解液(無抑制劑) | 100ml | -20℃ |
使用說明書 | 1份 | |
操作步驟(僅供參考)：
(一)貼壁培養(yǎng)細(xì)胞
取Western及IP細(xì)胞裂解液室溫溶解混勻持續，根據(jù)需要選擇添加或不添加蛋白酶抑制劑等多個領域。
去除貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液，用PBS產品和服務、NS或無血清培養(yǎng)液清洗1次應用擴展，低速離心，棄上清增多，留取沉淀活動上。
按照6孔板每孔加入100～200μl裂解液的比例，加入Western及IP細(xì)胞裂解液進一步推進。移液器輕輕吹打安全鏈，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液作用于細(xì)胞1～5s內(nèi)創新為先，細(xì)胞就會被裂解真正做到。
10000～12000g，離心3～5min(如果用冷凍離心機(jī)4℃離心效果更佳)創新延展，取上清強化意識。
進(jìn)行后續(xù)的SDS-PAGE、Western進展情況、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作的積極性。
(二)懸浮培養(yǎng)細(xì)胞
1、 取Western及IP細(xì)胞裂解液室溫溶解混勻至關重要，根據(jù)需要選擇添加或不添加蛋白酶抑制劑不久前。
2、 低速離心懸浮細(xì)胞提升行動，棄上清能力建設，收集沉淀。
3、 用手指輕彈細(xì)胞無障礙，使其松散連日來。按照6孔板每孔細(xì)胞加入100～200μl裂解液的比例，加入Western及IP細(xì)胞裂解液認為。通常6孔板每孔細(xì)胞加入100μl裂解液已經(jīng)足夠系統，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到150～200μl，再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞重要意義。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀交流等。
4、 10000～12000g規劃，4℃離心3～5min(如無低溫離心機(jī)提高，室溫下離心亦可)，取上清進入當下。
5紮實、 進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western新體系、免疫沉淀等操作投入力度。
(三)組織樣本
1、 取Western及IP細(xì)胞裂解液置于室溫溶解混勻尤為突出，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇添加或不添加蛋白酶抑制劑物聯與互聯。
2、 把組織jian切成細(xì)小的碎片改造層面，越小越好。
3優勢與挑戰、 取在液氮或超低溫冰箱中冷凍30min以上的組織經驗分享，迅速用液氮研磨，研磨過程盡量控制在1～2min之內(nèi)趨勢，以減少蛋白的降解有力扭轉。
4、 按照每20mg組織加入100～200μl裂解液的比例一站式服務，加入含有PMSF的裂解液廣度和深度。冰上或4℃裂解30～60min。
5引領作用、 步驟3加強宣傳、4亦可以采用如下過程：按照每20mg組織加入100～200μl裂解液的比例加入Western及IP細(xì)胞裂解液。用玻璃勻漿器或組織研磨器勻漿用的舒心，直至充分裂解技術發展，過程盡量控制在1～2min之內(nèi)，以減少蛋白的降解。
6重要手段、 按照每20mg組織加入100～200μl裂解液的比例互動講，加入Western及IP細(xì)胞裂解液。
7像一棵樹、 10000～12000g過程中，4℃離心10～15min(如無低溫離心機(jī)，室溫下離心亦可)能運用，取上清達到。
8、 進(jìn)行后續(xù)的PAGE工具、Western智慧與合力、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
注意事項(xiàng)：
1.去除貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液時重要的角色，如果血清中的蛋白沒有干擾開放要求，可以不用清洗。
2.如果裂解不充分可以適當(dāng)增加裂解液的用量也逐步提升，如果需要高濃度的蛋白樣品記得牢，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。
3.如果細(xì)胞量較多重要的作用，必需分裝成50～100萬細(xì)胞/離心管更多可能性，然后再裂解。大團(tuán)的細(xì)胞較難裂解充分足夠的實力，而少量的細(xì)胞由于裂解液容易和細(xì)胞充分接觸緊迫性，相對比較容易裂解充分。
4.如果組織樣品本身非常細(xì)小更適合，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解高效，通過強(qiáng)烈Vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清要素配置改革，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)體系。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便，不必使用勻漿器帶動產業發展，缺點(diǎn)是不如使用勻漿5.器那樣裂解得比較充分責任製。
6.溶解NobleRyder Cell lysis buffer for Western and IP時，應(yīng)盡量縮短溶解時間倍增效應，避免裂解液中的有效成分失效規則製定。
7.細(xì)胞裂解的操作步驟，應(yīng)置于冰上或4℃進(jìn)行優化服務策略。
有效期： 12個月有效發揮效力。
NobleRyder Western及IP細(xì)胞裂解液
