NobleRyder Western及IP細(xì)胞裂解液
NobleRyder Western及IP細(xì)胞裂解液 即用型液體試劑 P4809-100ml
NobleRyder Western及IP細(xì)胞裂解液
產(chǎn)品簡介：
多種成分均可以從細(xì)胞中提取總蛋白覆蓋，如Triton供給、SDS行動力、NP-40等提高鍛煉。Western及IP細(xì)胞裂解液是采用一種非變性裂解方法來裂解細(xì)胞智能化，并獲得總蛋白的裂解液充分。所獲得的蛋白質(zhì)可以用于PAGE電泳進一步完善，Western集聚，免疫沉淀(Immunol Precipitation,IP)和免疫共沉淀(co-IP)等，主要由Tris-HCl橫向協同、NaCl哪些領域、低濃度Triton X-100， 低濃度sodium pyrophosphate等組成不斷創新，并含有多種蛋白酶抑制劑成分建立和完善，可以有效抑制蛋白的降解，并維持原有的蛋白間相互作用參與水平。
用NobleRyder Western及IP細(xì)胞裂解液得到的蛋白大型，可以用BCA蛋白定量試劑盒測(cè)定蛋白濃度。由于含有較高濃度的Triton X-100等干擾物質(zhì)明確相關要求，不宜用Bradford法測(cè)定由Western及IP細(xì)胞裂解液獲得樣本的蛋白濃度重要意義。
產(chǎn)品組成：
編號(hào) 名稱 | P4809 | Storage |
Western及IP細(xì)胞裂解液 | 100ml | -20℃ |
PMSF(100mM) | 1.5ml | -20℃ |
使用說明書 | 1份 | |
操作步驟(僅供參考)：
(一)貼壁培養(yǎng)細(xì)胞
取Western及IP細(xì)胞裂解液置于室溫溶解混勻，加入PMSF體製，使PMSF終濃度為1mM構建。
去除貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液，用PBS服務延伸、NS或無血清培養(yǎng)液清洗1次共創輝煌，低速離心，棄上清進一步，留取沉淀大部分。
按照6孔板每孔加入100～200μl含有PMSF的裂解液的比例，加入Western及IP細(xì)胞裂解液實際需求。移液器輕輕吹打解決方案，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液作用于細(xì)胞1～5s內(nèi)善謀新篇，細(xì)胞就會(huì)被裂解增產。
10000～12000g，離心3～5min(如果用冷凍離心機(jī)4℃離心效果更佳)方法，取上清行動力。
進(jìn)行后續(xù)的SDS-PAGE、Western切實把製度、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作保供。
(二)懸浮培養(yǎng)細(xì)胞
取Western及IP細(xì)胞裂解液置于室溫溶解混勻，加入PMSF進行部署，使PMSF終濃度為1mM責任。
低速離心懸浮細(xì)胞，棄上清示範，收集沉淀應用前景。
用手指輕彈細(xì)胞有很大提升空間，使其松散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入100～200μl含有PMSF的裂解液的比例預下達，加入Western及IP細(xì)胞裂解液的有效手段。通常6孔板每孔細(xì)胞加入100μl裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到150～200μl方案，再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞關鍵技術。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。
10000～12000g深入，4℃離心3～5min(如無低溫離心機(jī)技術研究，室溫下離心亦可)，取上清開展研究。
進(jìn)行后續(xù)的PAGE姿勢、Western、免疫沉淀等操作首要任務。
(三)組織樣本
取Western及IP細(xì)胞裂解液置于室溫溶解混勻綠色化，加入PMSF，使PMSF終濃度為1mM發展。
把組織jian切成細(xì)小的碎片保持穩定，越小越好。
取在液氮或超低溫冰箱中冷凍30min以上的組織面向，迅速用液氮研磨支撐作用，研磨過程盡量控制在1～2min之內(nèi)，以減少蛋白的降解建設項目。
按照每20mg組織加入100～200μl裂解液的比例最為突出，加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解30～60min相結合。
步驟3高效化、4亦可以采用如下過程：按照每20mg組織加入100～200μl裂解液的比例加入含有PMSF的Western及IP細(xì)胞裂解液。用玻璃勻漿器或組織研磨器勻漿為產業發展，直至充分裂解範圍和領域，過程盡量控制在1～2min之內(nèi)，以減少蛋白的降解有效保障。
按照每20mg組織加入100～200μl裂解液的比例大數據，加入含有PMSF的裂解液長效機製。
10000～12000g講實踐，4℃離心10～15min(如無低溫離心機(jī)，室溫下離心亦可)奮戰不懈，取上清市場開拓。
進(jìn)行后續(xù)的PAGE措施、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作要落實好。
注意事項(xiàng)：
1.去除貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液時(shí)緊密相關，如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不用清洗先進技術。
2.如果裂解不充分可以適當(dāng)增加裂解液的用量培訓，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量宣講手段。
3.如果細(xì)胞量較多重要工具，必需分裝成50～100萬細(xì)胞/離心管，然后再裂解配套設備。大團(tuán)的細(xì)胞較難裂解充分更優質，而少量的細(xì)胞由于裂解液容易和細(xì)胞充分接觸，相對(duì)比較容易裂解充分推進高水平。
4.如果組織樣品本身非常細(xì)小脫穎而出，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過強(qiáng)烈Vortex使樣品裂解充分生產創效。然后同樣離心取上清結構，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便橫向協同，不必使用勻漿器哪些領域，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
5.溶解NobleRyder Cell lysis buffer for Western and IP時(shí)不斷創新，應(yīng)盡量縮短溶解時(shí)間建立和完善，避免裂解液中的有效成分失效。
6.細(xì)胞裂解的操作步驟參與水平，應(yīng)置于冰上或4℃進(jìn)行大型。
有效期： 12個(gè)月有效。
NobleRyder Western及IP細(xì)胞裂解液
