NobleRyder Triton-SDS細(xì)胞裂解液
NobleRyder Triton-SDS細(xì)胞裂解液 即用型液體試劑 P4817-100ml
Triton-SDS細(xì)胞裂解液
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
Triton-SDS細(xì)胞裂解液由 Triton X-100信息化、SDS、Tris-HCl等組成有很大提升空間，并含有蛋白酶抑制劑成分，可以有效抑制蛋白的降解，并維持原有的蛋白間相互作用參與水平。作用原理是利用Triton X-100破壞脂質(zhì)雙分子層，溶解胞質(zhì)和細(xì)胞膜服務效率，破壞分子間微弱結(jié)合鍵的大部分蛋白質(zhì)抗原明確相關要求。其濃度在0.1%～1%時(shí)即可滿足幾乎所有溶解的需求重要意義，且可補(bǔ)充等離子濃度的鹽及使pH接近中性。所獲得的蛋白質(zhì)可以用于PAGE電泳行業內卷，Western追求卓越，免疫沉淀(Immunol Precipitation，IP)和免疫共沉淀(co-IP)等參與能力。不宜用Bradford法測(cè)定由Triton-SDS細(xì)胞裂解液獲得樣本的蛋白濃度合理需求。
NobleRyder Triton-SDS細(xì)胞裂解液
產(chǎn)品組成：
編號(hào) 名稱(chēng) | P4817 | Storage |
Triton-SDS Lysis Buffer | 100ml | -20℃ |
PMSF(100mM) | 1.5ml | -20℃ |
使用說(shuō)明書(shū) | 1份 | |
操作步驟(僅供參考)：
(一)貼壁培養(yǎng)細(xì)胞
取Triton-SDS Lysis Buffer置于室溫溶解混勻，加入PMSF充分發揮，使PMSF終濃度為1mM高質量。
去除培養(yǎng)液，用PBS提高、NS或無(wú)血清培養(yǎng)液清洗1次機構，低速離心，棄上清交流，留取沉淀基礎。
按照6孔板每孔加入150～250μl含有PMSF的裂解液的比例加入riton-SDS Lysis Buffer。移液器輕輕吹打還不大，使裂解液和細(xì)胞充分接觸高產。置于冰上或4℃裂解，通常裂解液作用于細(xì)胞1～3s內(nèi)發揮作用，細(xì)胞就會(huì)被裂解良好。通常6孔板每孔細(xì)胞加入150μl裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200～250μl銘記囑托。
10000～12000g引領，4℃離心5～10min(如無(wú)低溫離心機(jī)，室溫下離心亦可)示範，取上清應用前景。
進(jìn)行后續(xù)的SDS-PAGE、Western運行好、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作首次。
(二)懸浮培養(yǎng)細(xì)胞
取Triton-SDS Lysis Buffer置于室溫溶解混勻后加入PMSF，使PMSF終濃度為1mM部署安排。
低速離心懸浮細(xì)胞搖籃，棄上清，收集沉淀推廣開來。
用手指輕彈細(xì)胞推動，使其松散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150～250μl含有PMSF的裂解液的比例完善好，加入Triton-SDS Lysis Buffer大面積。通常6孔板每孔細(xì)胞加入150μl裂解液已經(jīng)足夠積極參與，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200～250μl。
10000～12000g培養， 4℃離心5～10min(如無(wú)低溫離心機(jī)交流研討，室溫下離心亦可)，取上清形式。
進(jìn)行后續(xù)的SDS-PAGE建設應用、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作日漸深入。
(三)組織樣本
取Triton-SDS Lysis Buffer置于室溫溶解混勻后加入PMSF動力，使PMSF終濃度為1mM。
把組織jian切成細(xì)小的碎片互動式宣講，越小越好效高性。
取在液氮或超低溫冰箱中冷凍30min以上的組織，迅速用液氮研磨自動化，研磨過(guò)程盡量控制在1～2min之內(nèi)提升，以減少蛋白的降解。
按照每20mg組織加入150～250μl裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液不折不扣。冰上或4℃裂解15～30min支撐能力。
步驟3、4亦可以采用如下過(guò)程：按照每20mg組織加入150～250μl裂解液的比例加入含有PMSF的Triton-SDS Lysis Buffer高效利用。用玻璃勻漿器或組織研磨器勻漿特征更加明顯，直至充分裂解，該過(guò)程盡量控制在1～2min之內(nèi)講理論，以減少蛋白的降解的可能性。
10000～12000g，4℃離心5～10min(如無(wú)低溫離心機(jī)服務為一體，室溫下離心亦可)措施，取上清。
進(jìn)行后續(xù)的PAGE要落實好、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作更默契了。
注意事項(xiàng)：
去除貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液后先進技術，如果血清中的蛋白沒(méi)有干擾，可以不用清洗說服力。
如果裂解不充分可以適當(dāng)增加裂解液的用量搶抓機遇，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量表示。
如果細(xì)胞量較多全面闡釋，必需分裝成50～100萬(wàn)細(xì)胞/離心管非常激烈，然后再裂解。大團(tuán)的細(xì)胞較難裂解充分引人註目，而少量的細(xì)胞由于裂解液容易和細(xì)胞充分接觸領域，相對(duì)比較容易裂解充分。
如果組織樣品本身非常細(xì)小好宣講，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解註入新的動力，通過(guò)強(qiáng)烈Vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)雙重提升。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便，不必使用勻漿器事關全面，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分表現明顯更佳。
溶解Triton-SDS Lysis Buffer時(shí)，應(yīng)盡量縮短溶解時(shí)間技術節能，避免裂解液中的有效成分失效指導。
裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物，屬正陈搫?，F(xiàn)象增持能力。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物。在不檢測(cè)和基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下行業內卷，可以直接離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)追求卓越。如果需要檢測(cè)和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可以通過(guò)超聲處理打碎打散該透明膠狀物參與能力，隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)合理需求。
細(xì)胞裂解的操作步驟，應(yīng)置于冰上或4℃進(jìn)行充分發揮。
有效期： 12個(gè)月有效高質量。
NobleRyder Triton-SDS細(xì)胞裂解液
