NobleRyder Triton X-100細(xì)胞裂解液
NobleRyder Triton X-100細(xì)胞裂解液 即用型液體試劑 P4816-100ml
Triton X-100細(xì)胞裂解液
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
Triton X-100細(xì)胞裂解液是一種經(jīng)典的快速裂解細(xì)胞組織并獲得蛋白的裂解液。所獲得的蛋白質(zhì)可以用于PAGE電泳，Western適應性，免疫沉淀(Immunol Precipitation，IP)和免疫共沉淀(co-IP)等。Triton X-100規模設備、NaCl、Tris-HCl等組成指導，并含有多種蛋白酶抑制劑成分競爭力，可以有效抑制蛋白的降解，并維持原有的蛋白間相互作用進一步完善。作用原理是利用去污劑Triton X-100破壞脂質(zhì)雙分子層集聚，溶解胞質(zhì)和細(xì)胞膜競爭力，破壞分子間微弱結(jié)合鍵的大部分蛋白質(zhì)抗原。其濃度在0.1%～1%時(shí)即可滿足幾乎所有溶解的需求狀況，且可補(bǔ)充等離子濃度的鹽及使pH接近中性機製性梗阻。不宜用Bradford法測(cè)定由Triton X-100 Lysis Buffer獲得樣本的蛋白濃度。
NobleRyder Triton X-100細(xì)胞裂解液
產(chǎn)品組成：
編號(hào) 名稱 | P4816 | Storage |
Triton X-100 Lysis Buffer | 100ml | -20℃ |
PMSF(100mM) | 1.5ml | -20℃ |
使用說明書 | 1份 | |
操作步驟(僅供參考)：
(一)貼壁培養(yǎng)細(xì)胞
取Triton X-100 Lysis Buffer室溫溶解混勻全過程，加入PMSF生產效率，使PMSF終濃度為1mM。
去培養(yǎng)液效果，用PBS使用、NS或無血清培養(yǎng)液清洗1次，低速離心密度增加，棄上清主要抓手，留取沉淀。
按照6孔板每孔加入150～250μl含有PMSF的裂解液的比例加入Triton X-100 Lysis Buffer構建。移液器輕輕吹打創新科技，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。置于冰上或4℃裂解共創輝煌，通常裂解液作用于細(xì)胞1～3s內(nèi)具有重要意義，細(xì)胞就會(huì)被裂解。通常6孔板每孔細(xì)胞加入150μl裂解液已經(jīng)足夠大部分，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200～250μl強大的功能。
10000～12000g，4℃離心5～10min(如無低溫離心機(jī)解決方案，室溫下離心亦可)優勢，取上清。
進(jìn)行后續(xù)的SDS-PAGE增產、Western便利性、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(二)懸浮培養(yǎng)細(xì)胞
取Triton X-100 Lysis Buffer室溫溶解混勻行動力，加入PMSF提供有力支撐，使PMSF終濃度為1mM。
低速離心懸浮細(xì)胞保供，棄上清自行開發，收集沉淀。
用手指輕彈細(xì)胞振奮起來，使其松散品質。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150～250μl含有PMSF的裂解液的比例，加入NobleRyder Triton X-100 Lysis Buffer 。通常6孔板每孔細(xì)胞加入150μl裂解液已經(jīng)足夠解決問題，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200～250μl系列。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞，充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀相互配合。
10000～12000g慢體驗， 4℃離心5～10min(如無低溫離心機(jī)，室溫下離心亦可)智能化，取上清科技實力。
進(jìn)行后續(xù)的SDS-PAGE、Western技術研究、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作重要的。
(三)組織樣本
取Triton X-100 Lysis Buffer室溫溶解混勻后，加入PMSF姿勢，使PMSF終濃度為1mM相互融合。
把組織jian切成細(xì)小的碎片，越小越好綠色化。
取在液氮或超低溫冰箱中冷凍30min以上的組織不同需求，迅速用液氮研磨，研磨過程盡量控制在1～2min之內(nèi)保持穩定，以減少蛋白的降解總之。
按照每20mg組織加入150～250μl裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解15～30min支撐作用。
步驟3研學體驗、4亦可以采用如下過程：按照每20mg組織加入150～250μl裂解液的比例加入含有PMSF的Triton X-100 Lysis Buffer。用玻璃勻漿器或組織研磨器勻漿規模，直至充分裂解近年來，該過程盡量控制在1～2min之內(nèi)講道理，以減少蛋白的降解發展目標奮鬥。
10000～12000g，4℃離心5～10min(如無低溫離心機(jī)更多的合作機會，室溫下離心亦可)延伸，取上清。
進(jìn)行后續(xù)的PAGE服務好、Western新趨勢、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
注意事項(xiàng)：
去除貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液后共謀發展，如果血清中的蛋白沒有干擾學習，可以不用清洗。
如果裂解不充分可以適當(dāng)增加裂解液的用量，如果需要高濃度的蛋白樣品應用優勢，可以適當(dāng)減少裂解液的用量高質量發展。
如果細(xì)胞量較多，必需分裝成50～100萬細(xì)胞/離心管高效節能，然后再裂解影響力範圍。大團(tuán)的細(xì)胞較難裂解充分，而少量的細(xì)胞由于裂解液容易和細(xì)胞充分接觸培訓，相對(duì)比較容易裂解充分不合理波動。
如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解重要工具，通過強(qiáng)烈Vortex使樣品裂解充分積極拓展新的領域。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)更優質。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便多種方式，不必使用勻漿器，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分技術創新。
溶解Triton X-100 Lysis Buffer時(shí)深入交流研討，應(yīng)盡量縮短溶解時(shí)間，避免有效成分失效廣泛應用。
裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物關註度，屬正常現(xiàn)象哪些領域。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物敢於挑戰。在不檢測(cè)和基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)建立和完善。如果需要檢測(cè)和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白提供了遵循，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)大型。如果檢測(cè)一些常見的轉(zhuǎn)錄因子服務效率，例如NF-KB、p53等時(shí)重要意義，通常不必進(jìn)行超聲處理統籌發展，就可以檢測(cè)到這些轉(zhuǎn)錄因子。
細(xì)胞裂解的操作步驟體系，應(yīng)置于冰上或4℃進(jìn)行生產製造。
有效期： 12個(gè)月有效。
NobleRyder Triton X-100細(xì)胞裂解液
