NobleRyder RIPA裂解液(弱)
NobleRyder RIPA裂解液(弱) 即用型液體試劑 P4811-100ml
RIPA裂解液(弱)
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
多種成分均可從細(xì)胞中提取總蛋白模式，如Triton、SDS、NP-40等高品質。RIPA裂解液(弱) (Weak RIPA Lysis Buffer )是采用一種溫和的裂解方法獲得總蛋白的裂解液不折不扣。所獲得的蛋白質(zhì)可用于PAGE電泳、Western健康發展、免疫沉淀(Immunol Precipitation有效保障，IP)和免疫共沉淀(co-IP)等大數據。
NobleRyder Weak RIPA Lysis Buffer主要由Tris 長效機製、NP-40、sodium deoxycholate等組成數字技術，并含有多種蛋白酶抑制劑成分奮戰不懈，可以有效抑制蛋白的降解，并維持原有的蛋白間相互作用措施。
NobleRyder RIPA裂解液(弱)
產(chǎn)品組成：
編號(hào) 名稱(chēng) | P4811 | Storage |
Weak RIPA Lysis Buffer | 100ml | -20℃ |
PMSF(100mM) | 1.5ml | -20℃ |
使用說(shuō)明書(shū) | 1份 | |
操作步驟(僅供參考)：
(一)貼壁培養(yǎng)細(xì)胞
1.取Weak RIPA Lysis Buffer置于室溫溶解混勻大大縮短，加入PMSF，使PMSF終濃度為1mM緊密相關。
2.去除貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液更默契了，用PBS、NS或無(wú)血清培養(yǎng)液清洗1次培訓，低速離心不合理波動，棄上清，留取沉淀分析。
3.按照6孔板每孔加入150～250μl含有PMSF的裂解液的比例表示， 加入Weak RIPA Lysis Buffer。移液器輕輕吹打非常激烈，使裂解液和細(xì)胞充分接觸競爭力所在。置于冰上或4℃裂解，通常裂解液作用于細(xì)胞1～3s內(nèi)領域，細(xì)胞就會(huì)被裂解溝通機製。通常6孔板每孔細(xì)胞加入150μl裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200～250μl註入新的動力。
4.10000～12000g實現了超越，4℃離心5～10min(如無(wú)低溫離心機(jī)，室溫下離心亦可)去完善，取上清橋梁作用。
5.后續(xù)的SDS-PAGE、Western求索、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作讓人糾結。
(二)懸浮培養(yǎng)細(xì)胞
1.取Weak RIPA Lysis Buffer 置室溫溶解混勻后，加入PMSF，使PMSF終濃度為1mM基石之一。
2.低速離心懸浮細(xì)胞聯動，棄上清，收集沉淀共同努力。
3.用手指輕彈細(xì)胞行業內卷，使其松散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150～250μl含有PMSF的裂解液的比例逐漸完善，加入Weak RIPA Lysis Buffer 參與能力。通常6孔板每孔細(xì)胞加入150μl裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200～250μl是目前主流。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞充分發揮，充分裂解后應(yīng)沒(méi)有明顯的細(xì)胞沉淀。
4.10000～12000g充分發揮，4℃離心5～10min(如無(wú)低溫離心機(jī)選擇適用，室溫下離心亦可)，取上清設計。
5.進(jìn)行后續(xù)的SDS-PAGE薄弱點、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作優化程度。
(三)組織樣本
1.取Weak RIPA Lysis Buffer置于室溫溶解混勻后積極性，加入PMSF，使PMSF終濃度為1mM取得明顯成效。
2.把組織jian切成細(xì)小的碎片約定管轄，越小越好。
3.取在液氮或超低溫冰箱中冷凍30min以上的組織創新的技術，迅速用液氮研磨發揮，研磨過(guò)程盡量控制在1～2min之內(nèi)，以減少蛋白的降解快速增長。
4.按照每20mg組織加入150～250μl裂解液的比例開放以來，加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解15～30min高質量。
步驟3提供了有力支撐、4亦可以采用如下過(guò)程：按照每20mg組織加入150～250μl裂解液的比例加入含有PMSF的Weak RIPA Lysis Buffer。用玻璃勻漿器或組織研磨器勻漿前景，直至充分裂解進一步意見，該過(guò)程盡量控制在1～2min之內(nèi)，以減少蛋白的降解共享應用。
5.10000～12000g生產能力，4℃離心5～10min(如無(wú)低溫離心機(jī)標準，室溫下離心亦可)，取上清堅持好。
6.進(jìn)行后續(xù)的PAGE即將展開、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作特性。
注意事項(xiàng)：
1.去除貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液后傳承，如果血清中的蛋白沒(méi)有干擾，可以不用清洗建言直達。
2.如果裂解不充分可以適當(dāng)增加裂解液的用量多種，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量支撐作用。
3.如果細(xì)胞量較多日漸深入，必需分裝成50～100萬(wàn)細(xì)胞/離心管動力，然后再裂解綜合措施。大團(tuán)的細(xì)胞較難裂解充分，而少量的細(xì)胞由于裂解液容易和細(xì)胞充分接觸自然條件，相對(duì)比較容易裂解充分設計標準。
4.如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解互動互補，通過(guò)強(qiáng)烈Vortex使樣品裂解充分發揮重要帶動作用。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)意料之外。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便文化價值，不必使用勻漿器，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分置之不顧。
5.溶解NobleRyder RIPA Lysis Buffer時(shí)不斷完善，應(yīng)盡量縮短溶解時(shí)間，避免有效成分失效方便。
6.裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物基礎上，屬正常現(xiàn)象應用領域。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物保持競爭優勢。在不檢測(cè)和基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)發展機遇；如果需要檢測(cè)和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白長效機製，則可以通過(guò)超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)全技術方案。如果檢測(cè)一些常見(jiàn)的轉(zhuǎn)錄因子分享，例如NF-KB搶抓機遇、p53等時(shí)，通常不必進(jìn)行超聲處理表示，就可以檢測(cè)到這些轉(zhuǎn)錄因子全面闡釋。
7.細(xì)胞裂解的操作步驟，應(yīng)置于冰上或4℃進(jìn)行競爭力所在。
有效期： 12個(gè)月有效引人註目。
NobleRyder RIPA裂解液(弱)
