NobleRyder RIPA裂解液(強(qiáng),無抑制劑)
NobleRyder RIPA裂解液(強(qiáng),無抑制劑) 即用型液體試劑 P4833-100ml
NobleRyder RIPA裂解液(強(qiáng),無抑制劑)
產(chǎn)品簡介：
多種成分均可以從細(xì)胞中提取總蛋白，例如Triton、SDS服務品質、NP-40等。RIPA裂解液(強(qiáng))(Enhanced RIPA lysis buffer ,without inhibitors)是采用一種經(jīng)典的細(xì)胞組織快速裂解，并獲得總蛋白的裂解液營造一處，其裂解強(qiáng)度大于NP-40裂解液、RIPA裂解液(中)知識和技能。所獲得的蛋白質(zhì)可以用于Western重要意義，免疫沉淀(Immunol Precipitation，IP)等更加廣闊。
Enhanced RIPA lysis buffer without inhibitors 主要由Tris規劃、NP-40、sodium deoxycholate等組成可以使用，不含蛋白酶和磷酸酶抑制劑進入當下，并維持原有的蛋白間相互作用。
產(chǎn)品組成：
編號(hào) 名稱 | P4833 | Storage | |
Enhanced RIPA lysis buffer without inhibitors | 100ml | -20℃ | |
使用說明書 | 1份 | ||
操作步驟(僅供參考)：
(一)貼壁培養(yǎng)細(xì)胞
1效高化、取Enhanced RIPA lysis buffer室溫溶解混勻新體系，根據(jù)需要選擇添加或不添加抑制劑。
2創造、去除貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液不難發現，用PBS、NS或無血清培養(yǎng)液清洗1次設備製造，低速離心發展需要，棄上清，留取沉淀管理。
3顯示、按照 6 孔板每孔加入150～250μl含有PMSF的裂解液的比例， 加入 RIPA Lysis Buffer 新型儲能。移液器輕輕吹打創新能力，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。置于冰上或4℃裂解15～30min範圍，通常裂解液作用于細(xì)胞 1～3 秒內(nèi)求得平衡，細(xì)胞就會(huì)被裂解。通常 6 孔板每孔細(xì)胞加入 150μl裂解液已經(jīng)足夠空間廣闊，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200～250μl至關重要。
4、10000～12000g服務品質，4℃離心5～10min(如無低溫離心機(jī)的發生，室溫下離心亦可)，取上清。
5新的動力、進(jìn)行后續(xù)的SDS-PAGE的過程中、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作像一棵樹。
(二)懸浮培養(yǎng)細(xì)胞
1過程中、取 Enhanced RIPA Lysis Buffer室溫溶解混勻，根據(jù)需要選擇添加或不添加抑制劑能運用。
2達到、低速離心懸浮細(xì)胞，棄上清不可缺少，收集沉淀蓬勃發展。
3、用手指輕彈細(xì)胞積極回應，使其松散重要性。按照 6 孔板每孔細(xì)胞加入 150～250μl裂解液的比例，加入 Enhanced RIPA Lysis Buffer平臺建設。通常 6 孔板每孔細(xì)胞加入 150μl裂解液已經(jīng)足夠服務機製，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到 200～250μl。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞使用，充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀大幅拓展。
4、 10000～12000g更加堅強，4℃離心 5～10min(如無低溫離心機(jī)與時俱進，室溫下離心亦可)，取上清初步建立。
5綜合運用、 進(jìn)行后續(xù)的 SDS-PAGE、Western的方法、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作實事求是。
(三)組織樣本
1、取 Enhanced Lysis Buffer 置于室溫溶解混勻落到實處，根據(jù)需要選擇添加或不添加抑制劑服務水平。
2、把組織jian切成細(xì)小的碎片技術創新，越小越好處理方法。取在液氮或超低溫冰箱中冷凍 30min 以上的組織，迅速用液氮研磨持續向好，研磨過程盡量控制在1～2min 之內(nèi)習慣，以減少蛋白的降解發展基礎。
3、按照每20mg組織加入 150～250μl 裂解液的比例加入含有 PMSF 的裂解液建強保護。冰上或 4℃裂解 15-30min同期。
4、步驟 3真正做到、4 亦可以采用如下過程：按照每 20mg 組織加入 150～250μl 裂解液的比例加入含有 PMSF 的 Enhanced RIPA Lysis Buffer科普活動。用玻璃勻漿器或組織研磨器勻漿，直至充分裂解強化意識，該過程盡量控制在 1～2min 之內(nèi)，以減少蛋白的降解基本情況。
5現場、10000～12000g，4℃離心 5～10min(如無低溫離心機(jī)力量，室溫下離心亦可)我有所應，取上清。
6深入實施、進(jìn)行后續(xù)的 PAGE至關重要、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作效果。
注意事項(xiàng)：
1有所應、去除貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液后不同需求，如果血清中的蛋白沒有干擾方式之一，可以不用清洗服務。
2深刻變革、如果裂解不充分可以適當(dāng)增加裂解液的用量相結合，如果需要高濃度的蛋白樣品線上線下，可以適當(dāng)減少裂解液的用量創新延展。
3規劃、如果細(xì)胞量較多相關性，必需分裝成 50～100 萬細(xì)胞/離心管完成的事情，然后再裂解。大團(tuán)的細(xì)胞較難裂解充分穩定，而少量的細(xì)胞由于裂解液容易和細(xì)胞充分接觸改造層面，相對比較容易裂解充分。
4效高化、如果組織樣品本身非常細(xì)小新體系，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過強(qiáng)烈 Vortex使樣品裂解充分最為顯著。然后同樣離心取上清尤為突出，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)規定。
5、溶解RIPA Lysis Buffer 時(shí)空間載體，應(yīng)盡量縮短溶解時(shí)間高質量，避免有效成分失效。
6重要組成部分、裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物流程，屬正常現(xiàn)象勃勃生機。該透明膠狀物為含有基因組DNA 等的復(fù)合物助力各業。在不檢測和基因組 DNA 結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供有力支撐；如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白應用，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)品率。如果檢測一些常見的轉(zhuǎn)錄因子相貫通，例如 NF-KB、p53 等時(shí)積極影響，通常不必進(jìn)行超聲處理自動化方案，就可以檢測到這些轉(zhuǎn)錄因子。
7越來越重要、 細(xì)胞裂解的操作步驟線上線下，應(yīng)置于冰上或 4℃進(jìn)行。
有效期：12個(gè)月有效像一棵樹。
NobleRyder RIPA裂解液(強(qiáng),無抑制劑)
