NobleRyder RIPA裂解液(強(qiáng))
NobleRyder RIPA裂解液(強(qiáng)) 即用型液體試劑 P4813-100ml
NobleRyder RIPA裂解液(強(qiáng))
產(chǎn)品簡介：
多種成分均可以從細(xì)胞中提取總蛋白，例如 Triton活動上、SDS有望、NP-40 等。RIPA 裂解液（強(qiáng)） (Enhanced RIPA Lysis Buffer )，是采用一種經(jīng)典的細(xì)胞組織快速裂解方案，并獲得總蛋白的裂解液應用的選擇，其裂解強(qiáng)度大于 NP-40 裂解液、RIPA 裂解液(中)左右。所獲得的蛋白質(zhì)可以用于 Western背景下，免疫沉淀(Immunol Precipitation，IP)等可靠保障。Enhanced RIPA Lysis Buffer 主要由 Tris 自然條件、NP-40、sodium deoxycholate 等組成開展，并含有多種蛋白酶抑制劑成分互動互補，可以有效抑制蛋白的降解，并維持原有的蛋白間相互作用意向。
產(chǎn)品組成：
| 編號 名稱 | P4813 | Storage |
| Enhanced RIPA Lysis Buffer | 100ml | -20℃ |
| PMSF(100mM) | 1.5ml | -20℃ |
| 使用說明書 | 1份 | |
操作步驟(僅供參考)：
(一)貼壁培養(yǎng)細(xì)胞
1意料之外、 取 Enhanced RIPA Lysis Buffer 室溫溶解混勻，加入 PMSF開展面對面，使 PMSF 終濃度為 1mM。
2無障礙、 去除貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液連日來，用 PBS、NS 或無血清培養(yǎng)液清洗 1 次認為，低速離心系統，棄上清，留取沉淀重要意義。
3交流等、 按照 6 孔板每孔加入 150～250μl 含有 PMSF 的裂解液的比例，加入 RIPA Lysis Buffer 規劃。移液器輕輕吹打提高，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。置于冰上或 4℃裂解 15～30min進入當下，通常裂解液作用于細(xì)胞 1～3 秒內(nèi)紮實，細(xì)胞就會被裂解。通常 6 孔板每孔細(xì)胞加入 150μl 裂解液已經(jīng)足夠新體系，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到 200～250μl投入力度。
4、 10000～12000g不難發現，4℃離心 5～10min(如無低溫離心機(jī)貢獻法治，室溫下離心亦可)，取上清。5攻堅克難、 進(jìn)行后續(xù)的 SDS-PAGE管理、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作生動。
(二)懸浮培養(yǎng)細(xì)胞
1新型儲能、 取 Enhanced RIPA Lysis Buffer 室溫溶解混勻，加入 PMSF新品技，使 PMSF 終濃度為 1mM範圍。
2、 低速離心懸浮細(xì)胞紮實做，棄上清空間廣闊，收集沉淀。
3提供深度撮合服務、 用手指輕彈細(xì)胞用的舒心，使其松散。按照 6 孔板每孔細(xì)胞加入 150～250μl 含有 PMSF 的裂解液的比例集聚效應，加入 Enhanced RIPA Lysis Buffer集成。通常 6 孔板每孔細(xì)胞加入 150μl 裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到 200～250μl互動講。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞穩定性，充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。
4過程中、 10000～12000g去突破，4℃離心 5～10min(如無低溫離心機(jī)，室溫下離心亦可)達到，取上清智能設備。5、 進(jìn)行后續(xù)的 SDS-PAGE蓬勃發展、Western特點、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(三)組織樣本
1重要性、取 Enhanced Lysis Buffer 置于室溫溶解混勻向好態勢，，加入 PMSF服務機製，使 PMSF 終濃度為 1mM貢獻力量。
2、把組織jian切成細(xì)小的碎片大幅拓展，越小越好發行速度。取在液氮或超低溫冰箱中冷凍 30min 以上的組織更加堅強，迅速用液氮研磨，研磨過程盡量控制在 1～2min 之內(nèi)性能，以減少蛋白的降解初步建立。
3按照每 20mg 組織加入 150～250μl 裂解液的比例加入含有 PMSF 的裂解液。冰上或 4℃
裂解 15-30min供給。
4的方法、步驟 3、4 亦可以采用如下過程：按照每 20mg 組織加入 150～250μl 裂解液的比例加入含有 PMSF 的 Enhanced RIPA Lysis Buffer進行探討。用玻璃勻漿器或組織研磨器勻漿落到實處，直至充分裂解，該過程盡量控制在 1～2min 之內(nèi)十分落實，以減少蛋白的降解倍增效應。
5、 10000～12000g製造業，4℃離心 5～10min(如無低溫離心機(jī)優化服務策略，室溫下離心亦可)，取上清發展基礎。6兩個角度入手、 進(jìn)行后續(xù)的 PAGE、Western同期、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作生產效率。
注意事項：
1、 去除貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液后科普活動，如果血清中的蛋白沒有干擾創新延展，可以丌用清洗強化意識。
2長期間、 如果裂解丌充分可以適當(dāng)增加裂解液的用量，如果需要高濃度的蛋白樣品現場，可以適當(dāng)減
少裂解液的用量高端化。
3、 如果細(xì)胞量較多我有所應，必需分裝成 50～100 萬細(xì)胞/離心管提單產，然后再裂解。大團(tuán)的細(xì)胞較難
裂解充分至關重要，而少量的細(xì)胞由于裂解液容易和細(xì)胞充分接觸發展空間，相對比較容易裂解充分。
4有所應、 如果組織樣品本身非常細(xì)小足了準備，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解合作關系，通過強(qiáng)烈 Vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清深刻內涵，用于后續(xù)實驗傳遞。
5、 溶解 NobleRyder RIPA Lysis Buffer 時深入闡釋，應(yīng)盡量縮短溶解時間相關性，避免有效成分失效。
6統籌、 裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物最深厚的底氣，屬正常現(xiàn)象堅實基礎。該透明膠狀物為含有基因組 DNA 等的復(fù)合物稍有不慎。在丌檢測和基因組 DNA 結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續(xù)實驗等地；如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白最為顯著，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實驗規定。如果檢測一些常見的轉(zhuǎn)錄因子環境，例如 NF-KB、p53 等時高質量，通常丌必進(jìn)行超聲處理相對簡便，就可以檢測到這些轉(zhuǎn)錄因子。
7流程、 細(xì)胞裂解的操作步驟合作，應(yīng)置于冰上或 4℃進(jìn)行。
有效期： 12 個月有效助力各業。
NobleRyder RIPA裂解液(強(qiáng))
