超純全血總RNA快速提取試劑盒
適用于快速提取新鮮血液的總RNA覆蓋範圍,RNA可直接用于RT,RT-PCR積極性,RT-qPCR奮勇向前,普通轉錄組測序、RACE等實施體系。超純全血總RNA快速提取試劑盒
FlashPure Blood Total RNA Mini Kit
超純全血總 RNA 提取試劑盒(離心柱型)
超純全血總RNA快速提取試劑盒
目錄號:91215
產品內容
產品成份 | 91215-50(50 次) |
10X 紅細胞裂解液 RLB | 25 ml |
裂解液 RL | 50 ml |
去蛋白液 RE | 25 ml |
漂洗液 RW | 10 ml(需加入指ding量無水乙醇) |
70%乙醇 | 9 ml(需加入指ding量無水乙醇) |
RNase-Free H2O | 10 ml |
RNA 吸附柱和收集管 | 50 套 |
RNase-Free 1.5ml 離心管 | 50 支 |
自備試劑
無水乙醇組建、β-巰基乙醇
保存條件
室溫(15 ~ 25℃)下,存放 12 個月效果較好,不影響使用效果重要的意義。
產品簡介
適用于快速提取新鮮血液的總RNA,RNA可直接用于RT等多個領域,RT-PCR再獲,RT-qPCR,普通轉錄組測序應用擴展、RACE等體驗區。
產品特點
1. 高質:28s/18s=2:1,OD260/280=2.0~2.2發揮效力!
2. 高效:提取全過程僅需 20 min新格局!
操作步驟
提示:
①所有離心步驟均需要在室溫(15 ~37℃)下進行。
②第一次使用前安全鏈,請先在漂洗液 RW 和 70%乙醇中加入指ding量無水乙醇顯示。
③操作前,先用 RNase-Free H2O 將 10X 紅細胞裂解液 RLB 稀釋到 1X處理方法。
1. 在適合大小的 RNase free 離心管中加入 1 體積(0.5-1 ml)各種抗凝劑新鮮血液 (先顛倒混勻后)和 3 體積的紅細胞裂解液 RLB重要作用,顛倒混勻,可輕彈管壁習慣,確背渥?;靹颉?
2. 室溫放置 10 分鐘(期間應該顛倒輕彈混勻數次幫助裂解紅細胞)的積極性。
注意:如果 RNA 降解嚴重綠色化發展,可在冰上裂解,時間可以長一些以充分裂解。
3. 12,000 rpm 離心 20 秒用上了,倒棄紅色上清提升行動,并小心的盡可能多的吸棄上清
(注意不要吸到管底的細胞團),留下完整的管底白細胞團關註。
注意:離心后在管底應該見到白色的白細胞團研究進展,也可能有一些紅細胞殘片和白細胞團在一起,但是如果看到的是大部分的紅色細胞團連日來,說明紅細胞裂解很不充分快速融入,應該再加入紅細胞裂解液,重懸后重復步驟 2系統,3增強。
注意:上清盡可能che底吸棄,殘留過多會稀釋裂解液交流等,造成裂解異常更加廣闊,產量純度降低。
4. 渦旋或者輕彈管壁將白細胞沉淀wan全松散重懸提高,加入 1 ml 裂解液 RL可以使用,用移液槍反復吹打,充分裂解細胞紮實。
5. 將勻漿樣品劇烈震蕩混勻傳遞,在室溫(15 -30℃)條件下孵育 5 min,使得核酸蛋白復合物wan全分離深入闡釋。
6. 每1 ml裂解液 RL 加 0.2 ml 氯仿,蓋緊樣品管蓋完成的事情,劇烈振蕩 15 sec物聯與互聯,并在室溫下放置2min。
7. 12改造層面,000rpm 離心 10 min供給,樣品會分成三層:下層有機相,中間層和上層無色的水相經驗分享,RNA 存在于水相中解決方案。水相層的容量大約為所加 RL 體積的 60%,把水相轉移到新管中有力扭轉,進行下一步操作上高質量。
8. 向水相中加入等體積 70%乙醇,吹打混勻廣度和深度。
9. 每次轉移≤700 μl 水相混合物至一個 RNA 吸附柱中(吸附柱放入收集管中)深入交流,13,000 rpm 離心1 min,RNA 被吸附在膜上,棄濾液臺上與臺下。重復此過程用的舒心,直到溶液全部上柱。
10. 加500μl去蛋白液 RE集聚效應,室溫放置 1 min集成,13,000 rpm 離心 30 sec,棄濾液互動講。
11. 加入500μl漂洗液RW穩定性,13,000 rpm 離心 30 sec,棄濾液飛躍。
12. 重復步驟 11更高效。
13. 將 RNA 吸附柱放回收集管中,13,000 rpm 離心 2 min重要部署,che底除去膜上殘留的乙醇具體而言。
14. 取出 RNA 吸附柱,放入一個新的 1.5 ml RNase - free 離心管中智慧與合力,向吸附膜的中央部位懸空滴加30-50μl RNase free H2O(事先在70-90℃水浴中加熱可提高產量)發揮重要作用,室溫放置1min,13,000 rpm 離心1 min數據顯示,管底即是RNA溶液高質量。
15. 提取的RNA可直接用于下游實驗,或于-70℃保存記得牢,避免 RNA 降解註入了新的力量。
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