動(dòng)物組織細(xì)胞RNA/DNA共提試劑盒 核酸提取
Tissue/CellRNA/DNA/ProteinMiniKit（免氯仿）適用于從各種動(dòng)物組織、細(xì)胞中同時(shí)提取出總RNA建設應用、基因組DNA和Protein，提取全程不需要使用氯仿，得到包含總RNA，不需要DNaseI消化創新內容，可直接用于RT、RT-PCR廣泛關註、RT-qPCR、RACE集成技術、芯片就能壓製、測(cè)序等。動(dòng)物組織細(xì)胞RNA/DNA共提試劑盒 核酸提取
Tissue/CellRNA/DNA/ProteinMiniKit
動(dòng)物組織/細(xì)胞RNA/DNA/Protein共提試劑盒
動(dòng)物組織細(xì)胞RNA/DNA共提試劑盒 核酸提取
目錄號(hào)：91316
產(chǎn)品內(nèi)容
產(chǎn)品成份 | 91316-50（50次） |
裂解液MRLPlus | 50ml |
去蛋白液RW1 | 40ml |
漂洗液RW | 10ml（需加入指ding量無水乙醇） |
RNase-FreeddH2O | 5ml |
70%乙醇 | 9ml（需加入指ding量無水乙醇） |
抑制物去除液IR | 25ml |
漂洗液WB | 13ml（需加入指ding量無水乙醇） |
緩沖液APP | 60ml |
洗脫緩沖液EB | 10ml |
gDNA吸附柱和收集管 | 50套 |
RNA吸附柱和收集管 | 50套 |
RNase-Free1.5ml離心管 | 50支 |
RNase-Free2.0ml液氮研磨管 | 50支 |
自備試劑
無水乙醇
保存條件
室溫（15~25℃）
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
Tissue/CellRNA/DNA/ProteinMiniKit（免氯仿）適用于從各種動(dòng)物組織適應能力、細(xì)胞中同時(shí)提取出總RNA更優美、基因組DNA和Protein，提取全程不需要使用氯仿防控，得到包含總RNA成效與經驗，不需要DNaseI消化，可直接用于RT堅實基礎、RT-PCR稍有不慎、RT-qPCR、RACE等地、芯片最為顯著、測(cè)序等∫幎?；蚪MDNA也可以直接用于下游的Southern環境、酶切、PCR等各種試驗(yàn)。
du特的裂解液迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞RNase/DNase相對簡便，然后裂解混合物RNA/DNA/Protein同時(shí)通過一個(gè)gDNA吸附柱重要組成部分，基因組DNA被吸附而RNA/Protein穿透濾過。gDNA吸附柱上的基因組DNA經(jīng)過一系列漂洗合作、洗脫后得到純凈基因組DNA有力扭轉。濾過的總RNA，先用乙醇調(diào)節(jié)結(jié)合條件相互配合，然后轉(zhuǎn)入RNA吸附柱慢體驗，在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于RNA吸附柱上，接著通過一系列快速的離心-漂洗-離心-洗脫智能化，得到純凈的總RNA科技實力。濾液經(jīng)選擇性沉淀得到Protein。
注意事項(xiàng)
1.采集RNA樣本時(shí)建設，把新鮮組織樣本浸入RNAsafe(RNA樣品保存液在此基礎上，91115-100)中，可在37℃保存一天前來體驗，在25℃保存一周自主研發，在4℃保存一個(gè)月，在-20℃或者–80℃長(zhǎng)期保存更加廣闊。
2.樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融損耗，否則會(huì)影響RNA的提取得率和質(zhì)量。
3.提取時(shí)非常完善，RNA在裂解液MRLPlus中時(shí)不會(huì)被RNase降解性能穩定，但后續(xù)處理過程中應(yīng)使用不含RNase的吸頭和器皿。
4.樣品在加入裂解液MRLPlus并勻漿后作用，可在–80℃保存一個(gè)月以上情況正常。
5.所有的溶液應(yīng)該是澄清的，如果環(huán)境溫度低時(shí)溶液可能形成沉淀技術特點，此時(shí)不應(yīng)該直接使用提高鍛煉，可在37℃水浴加熱幾分鐘，即可恢復(fù)澄清凝聚力量。
重要提示：
①第一次使用前,請(qǐng)先在漂洗液RW有所提升、70%乙醇、漂洗液WB瓶中加入指ding量無水乙醇註入了新的力量，詳見瓶上的標(biāo)簽重要的作用。
②所有離心步驟均需要在室溫（15~25℃）下進(jìn)行，提取效果更佳去創新！
具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)
操作步驟
1.動(dòng)物組織：
a．電動(dòng)勻漿：取新鮮組織10~20mg加入500μl裂解液MRL Plus足夠的實力，電動(dòng)勻漿緊迫性，直到無明顯組織塊即可。
b．液氮研磨：液氮研磨組織成細(xì)粉更適合，取10~20mg組織細(xì)粉加入500μl裂解液MRL Plus高效，劇烈渦旋振蕩，直到無明顯粉末團(tuán)即可高質量發展。
c．將裂解物13,000rpm離心3min全方位，沉淀不能裂解的碎片。
d．下接操作步驟3影響力範圍。
2.細(xì)胞
a.懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞大局，加入500μl裂解液MRL Plus（<8x106細(xì)胞）,吹打混勻，劇烈渦旋振蕩20sec邁出了重要的一步，充分裂解有序推進。
b.貼壁細(xì)胞：不需要消化，吸棄培養(yǎng)基后需求，直接在培養(yǎng)皿/板中加裂解液MRLPlus（每<8x106細(xì)胞加500μl裂解液MRLPlus）進(jìn)行消化堅定不移、裂解；或者更讓我明白了，先用胰mei消化后離心收集細(xì)胞迎難而上，然后加入裂解液MRL Plus，吹打混勻探索，劇烈渦旋振蕩20sec堅持先行，充分裂解。
c.下接操作步驟3競爭力。
3.將裂解勻漿物（或離心得到的上清）全部加入gDNA吸附柱中（吸附柱放入收集管中）調整推進，13,000rpm離心1min，基因組DNA被吸附在膜上機製性梗阻，保留濾液（RNA/Protein在濾液中）。
把gDNA吸附柱放入2.0ml離心管全過程，置于4℃度集成應用，以備提取DNA用。
以下是總RNA的提取步驟：
4.向?yàn)V液中加入等體積的70%乙醇不負眾望，用移液器吹打混勻高效流通。
5.每次轉(zhuǎn)移≤750μl濾液混合物至RNA吸附柱中，13,000rpm離心1min精準調控，此時(shí)功能，RNA被吸附在膜上，保留濾液解決，以備提取Protein預期。
濾液中含有Protein開展試點，請(qǐng)轉(zhuǎn)入一個(gè)合適大小（至少2倍濾液體積）的離心管共同，用于步驟18開始的Protein提取推進一步。
6.加入700μl去蛋白液RW1，室溫放置1min,13,000rpm離心30sec簡單化，倒棄濾液力度。
7.加入500μl漂洗液RW（檢查是否已加入乙醇），13,000rpm離心30sec系統性，倒棄濾液勇探新路。
8.重復(fù)步驟7。
9.將RNA吸附柱放回空收集管中傳遞，13,000rpm離心2min試驗，除去膜上殘留的乙醇。
10.取出RNA吸附柱提供有力支撐，放入RNase-free1.5ml離心管中切實把製度，向RNA吸附膜的中央部位懸空滴加30~50μl的RNase-freeH2O，室溫放置1min自行開發，13,000rpm離心1min進行部署，管底即總RNA。
11.得到RNA應用情況，可直接用于下游實(shí)驗(yàn)保護好，或于-70℃保存，以免降解表現。
以下是DNA的提取步驟：
12.向步驟3的gDNA吸附柱中特點，加入500μl抑制物去除液IR，12,000rpm離心30sec結論，倒棄濾液和諧共生。
13.加入700μl漂洗液WB（檢查是否已加入乙醇），12,000rpm離心30sec適應性強，倒棄濾液技術交流。
14.加入500μl漂洗液WB，12,000rpm離心30sec拓展，倒棄濾液創造更多。
15.將DNA吸附柱放回空收集管中，13,000rpm離心2min不斷進步，盡量除去漂洗液大力發展，以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。
16.取出gDNA吸附柱生產效率，放入新的1.5ml的離心管中產能提升，向吸附膜的中央懸空滴加100μl洗脫緩沖液EB（洗脫緩沖液事先在65~70℃水浴中預(yù)熱效果更好）適應性，室溫放置3~5min，12,000rpm離心1min總之。將得到的溶液重新加入離心吸附柱中面向，室溫放置2min，12,000rpm離心1min研學體驗。
17.得到的DNA可以存放在2~8℃建設項目，如果要長(zhǎng)時(shí)間存放，可以放置在-20℃落實落細。
以下是提取Protein的步驟：
18.向步驟5的濾液中加入等體積的緩沖液APP相結合，渦旋振蕩混勻，室溫放置15min沉淀Protein製高點項目。
19.13,000rpm離心5~10min為產業發展，小心棄上清。加入0.5ml70%乙醇有所增加，顛倒混勻后各項要求，離心1min，小心棄上清越來越重要的位置，留下蛋白沉淀新技術，盡量將殘留液體用移液器吸干凈。
20.室溫晾干沉淀5~10min順滑地配合，注意一定讓乙醇揮發(fā)干凈深入，以免影響下游試驗(yàn)。
21.將蛋白沉淀溶解于30~150μl1x蛋白上樣緩沖液（如需要蛋白定量前沿技術，緩沖液中不應(yīng)該加入溴酚蘭）或其它下游試驗(yàn)要求的緩沖液中基礎。
由于裂解液MRLPlus強(qiáng)變性作用或者不同蛋白等電點(diǎn)，蛋白可能溶解比較困難多種方式，用移液器吹打幫助溶解或者改變PH值幫助蛋白溶解對外開放，短暫離心取上清使用∩钊虢涣餮杏?；蛘哂?%SDS或者8M尿素幫助溶解蛋白沉淀后做蛋白定量有序推進。如果需要BCA蛋白定量可能需要把8M尿素稀釋到3M。
22.95℃放置5min溶解和變性蛋白積極拓展新的領域，回復(fù)到室溫，最高速離心1min更優質，取上清進(jìn)行SDS-PAGE電泳或者westernblot等試驗(yàn)相對開放。
與RNA相關(guān)的產(chǎn)品：
71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）
71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）
71600-500 2x Univ ersal SYBR Green qPCR Mix(適用于所有qPCR儀)
與miRNA相關(guān)的產(chǎn)品：
71418-25 Script III miRNA 1st StandSynthesis Kit（加尾法）
71419-500 Script III miRNA Real-Time PCR Assaykit（for qPCR，加尾法）
71613-500 Script III miRNA RT-qPCR Detection kit（71418-25+71419-500）
動(dòng)物組織細(xì)胞RNA/DNA共提試劑盒 核酸提取
