高效sgRNA體外轉(zhuǎn)錄試劑盒-現(xiàn)貨
CRISPR/Cas9介導(dǎo)的基因編輯技術(shù)是現(xiàn)在生物學(xué)求索、醫(yī)學(xué)和育種研究等領(lǐng)域的常用手段知識和技能。該技術(shù)體系僅需要Cas9蛋白和sgRNA即可實(shí)現(xiàn)高效的基因編輯發展目標奮鬥，其中Cas9蛋白是通用組分（無需修改）機製，sgRNA則需要根據(jù)不同靶位點(diǎn)來設(shè)計(jì)和轉(zhuǎn)錄重要平臺。高效sgRNA體外轉(zhuǎn)錄試劑盒-現(xiàn)貨
FlashPure sgRNASynthesis Kit
高效 sgRNA 體外轉(zhuǎn)錄試劑盒
高效sgRNA體外轉(zhuǎn)錄試劑盒-現(xiàn)貨
目錄號(hào):91615
產(chǎn)品內(nèi)容
Components | 91615-25 25 rxns (20 μl/rxn) | 91615-50 50 rxns (20 μl/rxn) |
2×PCR Mix | 250 μl | 500 μl |
Primer Mix | 50 μl | 100 μl |
NTPs | 200 μl | 400 μl |
10×Reaction Buffer | 50 μl | 100 μl |
T7 Enzyme Mix | 50 μl | 100 μl |
DNase I | 25 μl | 50 μl |
Buffer MRC | 5 ml | 10 ml |
Wash Solution 1 | 6 ml | 12 m |
Wash Solution 2/3 | 5 ml | 10 ml |
RNase-Free H2O | 5 ml | 10 ml |
sgRNASpinColumnWithCollectionTubes | 25 套 | 50 套 |
保存條件： -20℃保存協同控製，有效期 12 個(gè)月振奮起來。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
CRISPR/Cas9介導(dǎo)的基因編輯技術(shù)是現(xiàn)在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)和育種研究等領(lǐng)域的常用手段利用好。該技術(shù)體系僅需要Cas9蛋白和sgRNA即可實(shí)現(xiàn)高效的基因編輯深入各系統，其中Cas9蛋白是通用組分（無需修改），sgRNA則需要根據(jù)不同靶位點(diǎn)來設(shè)計(jì)和轉(zhuǎn)錄系列。
高效sgRNA體外轉(zhuǎn)錄試劑盒采用T7 RNA聚合酶復(fù)合物高效轉(zhuǎn)錄spCas9sgRNA作用。試劑盒中的反應(yīng)體系根據(jù)sgRNA特點(diǎn)進(jìn)行優(yōu)化，每個(gè)反應(yīng)可在4小時(shí)內(nèi)（實(shí)際操作為半天或1天之內(nèi)）獲得多達(dá)100~200μg的sgRNA慢體驗。sgRNA可直接用Cas9蛋白體外切割著力增加，純化后可用于細(xì)胞注射等實(shí)驗(yàn)。
試劑盒中配備了合成sgRNA轉(zhuǎn)錄模板科技實力，sgRNA轉(zhuǎn)錄所需的全部試劑深入，用戶僅需要合成含有1條CRISPR靶點(diǎn)的引物就能完成sgRNA體外轉(zhuǎn)錄。
操作步驟：
1. 設(shè)計(jì)PCR正向引物重要的，替換標(biāo)紅的N(20)即可：
Primer Target：5’TAATACGACTCACTATAGGN(20)GTTTTAGAGCTAGAAATA -3’
注：spCas9識(shí)別的靶點(diǎn)為20nt開展研究，共20個(gè)堿基序列，N(20)為靶位點(diǎn)不包含PAM的20個(gè)堿基序列相互融合，建議避免選擇有3個(gè)（或3個(gè)以上）連續(xù)T堿基的位點(diǎn)首要任務。
2. 找公司合成Primer Target，稀釋到 1mM 濃度備用不同需求。
3. 配制PCR反應(yīng)體系：
Components | Volume (20μl) |
2×PCR Mix | 10 μl |
Primer Mix | 2 μl |
Primer Target（1mM） | 0.4 μl |
ddH2O | 7.6 μl |
4. 制備體外轉(zhuǎn)錄模板發展，設(shè)置反應(yīng)程序如下：
5. 按下表配制sgRNA轉(zhuǎn)錄體系，37℃反應(yīng)4 hours總之。（操作過程中采用無RNA酶耗材）
Components | Volume (20μl) |
NTPs | 8 μl |
PCR product（as template） | 8 μl |
10×Reaction Buffer | 2 μl |
T7 Enzyme Mix | 2 μl |
6. (可選步驟) 在反應(yīng)體系中加入1 μL的DNase I 面向，37℃孵育 15 min，消化轉(zhuǎn)錄的DNA模板工藝技術。
7. 過柱純化：
提示：第一次使用前請(qǐng)先在 Wash Solution 1 瓶和 Wash Solution 2/3 瓶中加入無水乙醇效率，加入體積請(qǐng)參照瓶上的標(biāo)簽，并做好標(biāo)記近年來。sgRNA 容易降解講道理，全程使用無酶耗材發展目標奮鬥，請(qǐng)小心操作、避免降解更多的合作機會。
（1）于冰上延伸，用 RNase-Free H2O 將 RNA 樣品補(bǔ)足至 100 μL， 加入 200 μL Buffer MRC服務好，輕柔混勻新趨勢。
（2）加入 375 μL（1.25 倍體積）無水乙醇并混勻。
（3）將上一步所得溶液加入一套吸附柱中共謀發展，13,000 rpm 離心 30 sec學習，棄濾液，將吸附柱重新套回收集管聽得懂。
（4）加入 700 μl Wash Solution 1（請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙 醇）應用優勢，13,000 rpm 離心 30 sec，棄濾液全方位。
（5）漂洗：加入 500 μl Wash Solution 2/3高效節能，13,000 rpm 離心 30 sec，棄濾液先進技術。
（6）二次漂洗：重復(fù)步驟（5）一次培訓。
（7）干燥：將離心吸附柱于 13,000 rpm 離心 2 min，甩干殘留的漂洗液宣講手段。
（8）洗脫：將吸附柱放入一個(gè)新的 1.5 ml 離心管中重要工具，在吸附膜的中央懸空滴加 10 ~ 40 μl RNase-Free H2O，室溫放置 2 min基礎，13,000 rpm 離心 1 min性能，收集 sgRNA多種方式，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)對外開放。
高效sgRNA體外轉(zhuǎn)錄試劑盒-現(xiàn)貨
